Identificação específica de lactobacillus por ARDRA e desenvolvimento de leite probiótico a partir de um dos isolados

• Main Author: Priscila Boneventi
• Other Authors: Lúcia Helena da Silva Miglioranza .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentos. 2008
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000144681

A utilização de novos isolados de Lactobacillus com características probióticas impõe uma seqüência de testes bioquímicos que visam à verificação do potencial biotecnológico destas linhagens. Testes bioquímicos permitiram selecionar 08 linhagens com características probióticas isoladas de fezes de crianças saudáveis da creche da Universidade Estadual de Londrina. No presente trabalho, essas linhagens foram identificadas molecularmente através da técnica de ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) e um isolado foi escolhido para a obtenção de um produto probiótico. Amplificou-se a região intergênica 16S - 23S do DNA ribossomal extraído dos isolados por PCR e os produtos foram submetidos à hidrólise com 11 enzimas de restrição. Os produtos desta reação foram verificados em eletroforese em gel de agarose 2,0% corado com brometo de etídeo 20mg/ml sob incidência de luz ultravioleta e fotodocumentado. As linhagens foram então, identificadas quanto as suas espécies como Enterococcus faecalis (2), Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum (04) e Bifidobacterium lactis e uma das linhagens de Lactobacillus plantarum foi submetida a estudo em leite desnatado reconstituído a 9,0%, no qual foram definidos os parâmetros de obtenção de um produto probiótico, o qual foi avaliado quanto às condições de crescimento, concentração e viabilidade dos microrganismos durante 60 dias de armazenamento a 5°C, bem como teste microbiológico para controle de qualidade. O leite probiótico atingiu uma acidez titulável máxima de 0,31%, não sendo considerado um leite fermentado por não ter atingido o mínimo de acidez preconizado pela legislação brasileira que é de 0,60%. A concentração de células viáveis manteve-se acima de 107 UFC/ml durante o período de armazenamento, acima do mínimo recomendado pela legislação que é de 106 UFC/ml. Seis marcas de leites fermentados comerciais foram avaliadas quanto ao pH, a acidez titulável, a concentração e a viabilidade dos microrganismos presentes. Todas as marcas se apresentaram dentro das normas exigidas pela legislação brasileira vigente quanto aos padrões para leite fermentado. A linhagem identificada como Lactobacillus plantarum apresentou características favoráveis à produção de um leite probiótico, atingindo uma concentração de células viáveis acima de 107 UFC/ml e mantendo essas contagens por no mínimo 60 dias durante a estocagem a 5°C. === The use of new isolates of characteristic probiotic Lactobacillus requires a sequence of biochemical tests aiming to verify the biotechnological potential of these strains. Biochemical tests allowed selecting 08 probiotic strains isolated from healthy children's feces in a day care center at the State University of Londrina. In this research, these strains have been molecularly identified through the technique of ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) and an isolated was chosen to obtain a probiotic product. The 16S?23S Ribosomal DNA intergenic spacers regions were extracted from the isolated by PCR and the products were submitted to hydrolysis with 11 restriction enzymes. The products of this reaction were electrophoresed in a 2.0% agarose gel, stained with ethidium bromide 20mg/ml, verified by ultraviolet light transillumination and photo documented. The strains were then identified as belonging to Enterococcus faecalis (2), Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum (04) and Bifidobacterium lactis species and one of the strains of Lactobacillus plantarum was used in this study. The strain was applied in a 9.0% w/w solids reconstituted skimmed milk to define the parameters for obtaining a probiotic product, which was evaluated for the conditions of culture growth, microorganisms? concentration and viability for 60 storage days at 5°C, and microbiological testing for quality control. The probiotic milk reached a maximum titratable acidity of 0.31% and is not considered fermented milk according to the Brazilian legislation that is 0.60%. The concentration of cells remained above of 107 CFU/ ml during the storage period, which is above the minimum recommended by the legislation, which is 106 CFU/ ml. Six commercial fermented milk were assessed for pH, titratable acidity, concentration and viability of probiotic microorganisms present. All of them were found within the standards required by Brazilian law for fermented milk. The strain identified as Lactobacillus plantarum presented favorable characteristics for a probiotic milk development, reaching a concentration of cells above 107 CFU/ ml and maintaining these counts by at least 60 storage days at 5°C.