Desenvolvimento de um modelo de vacinação contra Toxoplasma gondii empregando adenovírus recombinante

• Main Author: Braulia Costa Caetano
• Other Authors: Oscar Bruna Romero
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2005
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-87RNXA

=== In the present study, genes encoding the SAG1, SAG2 and SAG3 proteins of T. gondii were cloned into replication-deficient recombinant adenoviruses, after being modified for appropriate expression in mammalian cells. Modifications included removal of 3-end sequences encoding the GPI-anchoring motifs and, for SAG3, substitution of the 5´-end encoding the natural signal sequence for the influenza virus haemaglutinin signal sequence (HASS). After the characterization of the three recombinant adenoviruses and demonstration of in vitro expression of the SAG proteins, the viruses were employed in immunizations of BALB/c mice. Vaccination with the three recombinants led to production of specific anti-SAG IgG antibodies and also induced activation of specific IFN- producing CD8+ T cells. To determine if the vaccination with the recombinant vectors is capable of eliciting protection against the parasite, animals received a challenge with the highly virulent RH strain or, alternatively, the cystogenic P-Br strain. Results show that vaccination with SAG-recombinant adenoviruses did not increase the survival of animals after challenge with the RH strain, but promoted a significant decrease of 50-80% in brain cyst numbers in groups that received the P-Br strain. In such way, we conclude that immunization with recombinant adenoviruses encoding the T. gondii SAG1, SAG2 and SAG3 antigens is capable of activate specific Th1-biased immune responses against those proteins, and protect against common infective forms of the parasite. === No presente estudo, os genes que codificam as proteínas SAG1, SAG2 e SAG3 de T. gondii foram clonados em adenovírus recombinantes deficientes em replicação, após terem sido modificados para a expressão apropriada em células de mamíferos. As modificações incluíram a remoção, nos três genes, da extremidade 3 que codifica para o motivo de ancoragem em GPI e, no caso de SAG3, troca do peptídeo sinal nativo da proteína pelo peptídeo sinal da hemaglutinina do vírus influenza (HASS). Após a caracterização dos três adenovírus recombinantes e da demonstração da expressão das proteínas de interesse in vitro, os vírus foram empregados na imunização de camundongos BALB/c. A vacinação com os três recombinantes levou à produção de IgG anti-SAG específica, e ainda foi capaz de induzir ativação de células CD8+ produtoras de IFN- específicas. Para avaliar a capacidade dos vetores recombinantes em gerar proteção contra o parasita, os animais foram submetidos a desafio com a cepa RH altamente virulenta ou, alternativamente, com a cepa cistogênica P-Br de T. gondii. Os resultados mostram que a imunização com os adenovírus SAG-recombinantes não aumentou o tempo de sobrevivência dos animais após o desafio com a cepa RH, mas levou a uma redução significativa de 50-80% no número de cistos cerebrais dos animais dos animais que receberam a cepa P-Br. Dessa forma, pode-se concluir que a vacinação com os adenovírus recombinantes codificando os antígenos SAG1, SAG2 e SAG3 de T. gondii é capaz de ativar uma resposta imune específica e desviada para um perfil Th1 contra aquelas proteínas, e de proteger contra formas infectantes comuns do parasita.