Desenvolvimento de vacinas recombinantes contra malária humana e teste in vivo em modelo murino

• Main Author: Leoneide Erica Maduro Boillet
• Other Authors: Oscar Bruna Romero
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2009
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8MYGD7

=== Vaccines that provide protection against malaria are urgently needed fordisease control. Several studies have demonstrated that Apical membrane antigen-1 (AMA-1) and 19KDa fragment of merozoit surface protein (MSP-119) are the main vaccine candidates against blood stages of malaria due to their capacity to induce protection in humans and animals. In this study, we investigated the effect of P. vivax vaccine candidates genetically modified PvAMA-1 and PvMSP-1 in different combinations of prime-boost immunization protocols. With this aim we constructed recombinant adenoviruses expressing PvAMA-1 and PvMSP-1 to active and modulate an effective type of T-cell response. Equivalent recombinant polypeptides purified from E.coli-expressing bacteria were used to induce humoral response. After the characterization of vaccine antigens, BALB/c mice were immunized with virus and proteins formulated in Montanide ISA 720 adjuvant. The animals vaccinated with the following immunization protocols Ad/Ad, Ad/prot, prot/prot and prot/Ad generated specific anti-PvAMA-1 and anti-PvMSP-119 IgG antibodies. However, the prime-boost protocols prot/prot and prot/Ad efficiently enhanced antibodies response, showing high antibody titers to AMA-1 and MSP-119. PvAMA-1 was able to induce specific antigen-cellular proliferation and the protocols Ad/Ad and prot/prot were able to induce highest levels of cell proliferation. PvMSP-119 was able of elicited cell responses predominantly a Th1-biased, inducing higher levels of IFN-g, IL-2 e TNF-a. Furthermore, it was able to induce the production of IL-10 but not triggered the production of IL-4. In such way, we conclude that immunization with the prime-boost protocols prot/prot and prot/Ad induced efficient humoral and cellular immune response. In the other hand, Ad/Ad elicited efficient cellular immune response. These results are encouraging for preclinical studies in monkeys Aotus spp using the following three protocols prot/prot, prot/Ad and Ad/Ad === Vacinas que promovem a proteção contra a malária são urgentementenecessárias para o controle da doença. O antígeno 1 de membrana apical (AMA-1) e o fragmento de 19kDa da proteína 1 de superfície de merozoíto (MSP-119) são os principais candidatos a vacina contra o estágio sanguíneo da malária devido a estudos de proteção encorajadores em animais e humanos. Neste estudo, nós investigamos o efeito de candidatos a vacinas contra P.vivax geneticamente modificados, PvAMA-1 e PvMSP-119, em diferentes combinações de protocolos de imunizações do tipo dose-reforço. Com este objetivo foram construídos adenovírus recombinantes expressando PvAMA-1 ePvMSP-119 para modular e ativar uma resposta celular efetiva. Além disso, os polipeptídeos equivalentes foram expressos em E.coli, purificados e utilizados para induzir resposta humoral. Após a caracterização dos antígenos vacinais, os vírus recombinantes e as proteínas formuladas com o adjuvante Montanide ISA 720 foram empregados na imunização de camundongos BALB/c. A vacinação com os protocolos de imunização Ad/Ad, Ad/prot, prot/prot e prot/Ad levou à produção de IgG anti- PvAMA-1 e anti-PvMSP-119 específica em todosos grupos vacinais. No entanto, os protocolos prot/prot e prot/Ad foram mais eficientes, produzindo elevados títulos de anticorpos, tanto para PvAMA-1 como para PvMSP-119. PvAMA-1 foi capaz de induzir a proliferação celularantígeno específica, sendo que os protocolos Ad/Ad e prot/prot foram capazes de induzir maiores níveis de proliferação celular que os protocolos prot/Ad e Ad/prot. PvMSP-119 foi capaz de ativar resposta imune celular do tipo Th1, com elevados níveis de produção de IFN-g, IL-2 e TNF-a. Além disso, foi capaz de induzir a produção de IL-10, mas não desencadeou a produção de IL-4. Desta forma, pode-se concluir que a vacinação com os protocolos de imunização do tipo dose-reforço prot/prot, prot/Ad foram melhores em induzir resposta humoral e celular, já o protocolo Ad/Ad induziu uma melhor resposta celular. Estes resultados são encorajadores para estudos pré-clínicos em macacos Aotus spp e sugere-se a utilização dos protocolos prot/prot, prot/Ad e Ad/Ad