Parâmetros da ação antimicrobiana e da citotoxidade do ozônio para aplicação na Endodontia

• Main Author: Nogales, Carlos Goes
• Other Authors: Antoniazzi, Joao Humberto
• Format: Others
• Language: pt
• Published: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP 2011
• Subjects: Água ozonizada; Endodontic; Ozonated water; Ozone; Ozônio; Tratamento endodôntico
• Online Access: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23145/tde-16012012-142900/

Este estudo analisou a ação do ozônio como coadjuvante à terapia endodôntica. Assim, (I) avaliou da eficiência da água ozonizada na redução microbiana realizada sobre suspensão bacteriana de Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus estudo in vitro; (II) testou a eficiência da água ozonizada e o gás ozônio na redução microbiana realizada em canais radiculares contaminados estudo ex vivo; e, (III) avaliou a reação biológica de cultura de fibroblastos sob aplicação do ozônio pelo método MTT. Inicialmente a água ozonizada nas concentrações de 5, 20 e 40 g/mL foi aplicada diretamente sobre as suspensões bacterianas separadamente por um minuto. Em seguida, foram feitas diluições seriadas e o plaqueamento para posterior contagem das UFC/mL. Na segunda parte, 180 dentes foram inoculados com 10 L das suspensões bacterianas separadamente e incubados por 7 dias. Em seguida foram submetidos aos grupos experimentais: Grupo I: controle de contaminação; Grupo II: instrumentação rotatória associando o hipoclorito de sódio 1% ao Endo-PTC gel e irrigação final com EDTA-T; Grupo III: protocolo semelhante ao Grupo II com a aplicação final do gás ozônio na concentração de 40 g/mL; e, Grupo IV: protocolo semelhante ao Grupo II com a irrigação final com a água ozonizada na concentração de 40 g/mL. Na sequencia de cada grupo foi feita coleta microbiológica, diluição seriada e plaqueamento por 24 horas e contagem das UFC/mL. Na terceira parte, a análise da viabilidade celular dos fibroblastos. O PBS foi ozonizado nas concentrações de 10, 20 e 40 g/mL e aplicado sobre as células. Os dados foram tabulados e submetidos à análise estatística pelo método de Kruskal-Wallis, complementado pelo método de Dunn (p<0.05). A primeira parte do estudo mostrou que o E. faecalis apresentou crescimento nas concentrações de 5 e 20 g/mL. Na análise da P. aeruginosa e o S. aureus não foi possível detectar UFC/mL. Já no estudo ex vivo, o Grupo IV foi o mais efetivo contra os microrganismos testados, com diferença estatística para os demais grupos, quando dos dentes contaminados com a P. aeruginosa. O estudo da viabilidade mostrou que o ozônio, em 0 horas, ocasionou uma queda na viabilidade celular que foi revertida nos demais tempos experimentais. A concentração de 40 g/mL foi a que proporcionou maior estímulo ao final da avaliação, com diferença estatística significante ao Grupo Controle. Diante das metodologias aplicadas, pode-se concluir que (I) a concentração de 40 g/mL foi a mais efetiva para reduzir o número dos microrganismos testados; (II) o protocolo instituído para a fase de preparo químico cirúrgico que associou a terapia tradicional com a água ozonizada na concentração de 40 g/mL foi o mais efetivo; (III) o ozônio em contato com os fibroblastos de gengiva, inicialmente causou diminuição na viabilidade celular, que foi revertida nos tempos experimentais subsequentes. A concentração de 40 g/mL foi a que causou maior redução no número de células viáveis, porém foi a que proporcionou maior estímulo ao final do experimento, mostrando-se biocompatível com a linhagem celular testada; e, (IV) diante do conjunto dos dados experimentais, a água ozonizada na concentração de 40 g/mL, comparada com as demais concentrações testadas, é a que apresenta melhor desempenho quanto ao seu poder antimicrobiano e biocompatibilidade, justificando sua inserção no arsenal clínico na terapia endodôntica. === This study analyzed the action of ozone as an adjunct to endodontic therapy. So (I) evaluated the effectiveness of ozonated water in microbial reducing performed on bacterial suspension of Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus - in vitro study (II) tested the efficiency of ozone gas and ozonated water in reducing microbial held in contaminated root canals - ex vivo study, and (III) evaluated the biological response of fibroblasts culture in the application of ozone, according to MTT method. In the first part of the experiment the ozonated water at concentrations of 5, 20 and 40 g/mL was placed in direct contact with the bacterial suspensions separately for one minute. Then, serial dilutions were made for plating and subsequent counting of CFU/mL. In the second part, 180 teeth were inoculated with 10 L of bacterial suspensions and incubated separately for 7 days. They were then subjected to experimental groups: Group I: contamination control, Group II: rotary instrumentation combining 1%sodium hypochlorite and gel Endo-PTC, final irrigation with EDTA-T, Group III: similar protocol to Group II with final application of ozone gas in concentration of 40 g/mL, and Group IV: protocol similar to Group II with a final irrigation with ozonated water at concentration of 40 g/mL. Following each group was done microbiological collecting and serial dilution and plating for 24 hours and subsequent counting of CFU/mL. In the third part, the analysis of cell viability of gingival fibroblasts was performed by MTT method. The PBS has been ozonized at concentrations of 10, 20 and 40 g/mL and applied on the cells. Data were tabulated and analyzed statistically by Kruskal-Wallis method, complemented by Dunn\'s method (p <0.05). The first part of the study showed that E.faecalis grew in concentrations of 5 and 20 g/mL. The P. aeruginosa and S. aureus were susceptible to all three concentrations of ozonated water, it was not possible to detect CFU/mL. In the second part of the study, the Group IV was the most effective against the tested microorganisms, with statistical difference for the other groups, especially when the teeth were infected with P. aeruginosa. Finally, the third part of the study showed that ozone, at 0 hours, caused a decrease in cell viability that was reversed in the other experimental times. The concentration of 40 g/mL provided the greatest stimulus on the final evaluation period, with statistically significant difference to the control group. Given the methodologies applied, it can be concluded that (I) the concentration of 40 g/mL was most effective at reducing the number of microorganisms, (II) the protocol established for the standard chemical preparation stage associated with ozonated water at a concentration of 40 g/mL was the most effective, (III) the ozone in contact with the gingival fibroblasts, initially caused a decrease in cell viability, which was reversed in subsequent experimental times. The concentration of 40 g/mL was the one that caused a greater reduction in the number of viable cells, however, was that provided the greatest stimulus to the end of the experiment and proved to be biocompatible with the cell line tested, and (IV) on the set of experimental data, the ozonated water at a concentration of 40 g/mL , compared with the other concentrations tested, it has the best performance in terms of its biocompatibility and antimicrobial power, justifying their inclusion in the clinical arsenal in endodontic therapy.