La structure de la chromatine dans la régulation de la transcription des gènes d'ARN ribosomique chez Saccharomyces cerevisiae

• Main Author: Morin, Jean-François
• Other Authors: Leblanc, Benoît
• Language: French
• Published: Université de Sherbrooke 2008
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4796

Dans le but de mieux comprendre le rôle de la régulation de la structure de la chromatine sur la régulation de la transcription de classe I, nous avons étudié la distribution et le comportement de deux protéines associées à la chromatine au locus ribosomique. La première de ces protéines est Hmo1p, une protéine possédant une homologie de séquence avec le facteur UBF, un facteur de transcription de classe I présent chez les vertébrés. La seconde protéine est le variant d'histone H2A.Z, variant connu pour son implication dans la régulation de la transcription. Nous avons initialement étudié le comportement de Hmo1p au niveau du promoteur du gène d'ARNr 35S chez la levure par empreinte à la DNAseI et conclu qu'elle n'induit pas une circularisation de l'ADN à la manière des nucléosomes, comme le fait UBF au promoteur du gène ribosomique des mammifères. Nous avons également étudié l'affinité de Hmo1p pour la séquence primaire au locus ribosomique et conclu qu'elle ne possède pas d'affinité particulière ni pour la séquence primaire du promoteur ni pour d'autres parties du locus ribosomique. Nous avons étudié la distribution de Hmo1p au locus ribosomique par immunoprécipitation de la chromatine sur des cellules en croissance active de même que sur des cellules traitées à la rapamycine. Nous avons observé un enrichissement à proximité du promoteur, mais aucune différence en fonction de l'état de croissance. Nous avons conclu que la protéine Hmo1p n'est pas impliquée dans la régulation de la transcription au niveau du promoteur d'ARNr 35S. Nous avons ensuite analysé le comportement du variant d'histone H2A.Z par immunoprécipitation de la chromatine au niveau du locus ribosomique sur des cellules en croissance active, sur des cellules stimulées à la rapamycine et sur des cellules en phase stationnaire. Nous avons conclu que le variant d'histone est non seulement enrichi aux promoteurs du locus ribosomique, mais que cet enrichissement corrèle avec la forme euchromatique du locus ribosomique. Nous avons ensuite mesuré, d'après la quantité de nouveaux transcrits produits, l'effet de la délétion du gène HTZ1 sur la transcription de classe I. Cette délétion entraîne une chute d'environ 30% de la transcription du gène d'ARNr 35S. Nous concluons donc que le variant d'histone H2A.Z fait plus que corréler avec la forme euchromatique du locus ribosomique, mais qu'il joue effectivement un rôle dans la régulation de la transcription de classe I. Nous avons ensuite étudié le comportement du variant d'histone H2A.Z par immunoprécipitation de la chromatine au niveau des promoteurs de gènes de classe II impliqués dans la biosynthèse des ribosomes. Nous avons donc étudié le comportement du variant H2A.Z aux promoteurs de trois gènes de protéines ribosomiques ( RPS18B, RPS21 et RPS22B ) sur des cellules en croissance active, des cellules traitées à la rapamycine et des cellules en phase stationnaire. Nous avons conclu que non seulement le variant d'histone H2A.Z est enrichi aux promoteurs de gènes «RP», mais que cet enrichissement corrèle avec une répression récente de la transcription. En dernier lieu, nous avons étudié l'importance de la machinerie transcriptionnelle de classe I sur les différences de «comportement» du variant H2A.Z au locus ribosomique et aux gènes «RP» dans une souche PSW. Nous avons procédé par immunoprécipitation de la chromatine associée au variant H2A.Z au niveau du locus ribosomique sur des cellules en croissance active et sur des cellules traitées à la rapamycine. Nous avons conclu que la différence de «comportement» du variant H2A.Z ne peut être attribuée à la différence de machinerie transcriptionnelle.