Impact cellulaire de l'expression d'un mutant constitutivement actif du récepteur AT[indice inférieur 1] de l'angiotensine II

• Main Author: Auger-Messier, Mannix
• Other Authors: Guillemette, Gaétan
• Language: fre||eng
• Published: Université de Sherbrooke 2005
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4200

Le récepteur mutant constitutivement actif N111G-AT[indice inférieur 1] a la capacité de stimuler la protéine G[indice inférieur q/11] en absence d'angiotensine II (Ang II), l'agoniste endogène du récepteur AT[indice inférieur 1]. Nous avons montré que le récepteur N111G-AT[indice inférieur 1], bien qu'il couple efficacement à la protéine G[indice inférieur q/11], maintient un état de haute affinité pour l'Ang II même en présence d'agents découplants. Afin de déterminer si cette propriété du récepteur N111G-AT[indice inférieur 1] découle d'un changement de conformation intrinsèque ou plutôt d'une interaction plus stable avec la protéine G[indice inférieur q/11], nous avons montré par co-immunoprécipitation que le récepteur N111G-AT[indice inférieur 1] couple de façon réversible à la protéine Gα[indice inférieur q/11] . D'autre part, nous avons montré que l'expression stable du récepteur N111G-AT[indice inférieur 1] dans les cellules HEK-293 (cellules N111G) mène à la génération spontanée d'oscillations calciques en absence d'Ang II. Par contre, en dépit de cette mobilisation calcique constante au repos, les cellules N111G présentent une désensibilisation hétérologue de la voie de relâche du Ca[indice supérieur 2+]. Nous avons montré par des essais fonctionnels (relâche de Ca[indice supérieur 2+] par l'inositol 1,4,5-trisphosphate (IP[indice inférieur 3]) sur des cellules perméabilisées à la saponine) et biochimiques (liaison d'[[indice supérieur3]]-IP[indice inférieur 3] et immunobuvardage des récepteurs de l'IP[indice inférieur 3] (IP[indice inférieur 3]Rs)) que le niveau des IP[indice inférieur 3]Rs dans les cellules N111G est fortement diminué. Le mécanisme par lequel cette désensibilisation survient passe par une dégradation accrue des IP[indice inférieur 3]Rs par la voie du lysosome. Le traitement prolongé (24-48 h) des cellules N111G avec l'EXP3174, un agoniste inverse du récepteur AT[indice inférieur 1], permet de renverser cette désensibilisation de la voie de relâche calcique. La signalisation constante du récepteur N111G-AT[indice inférieur 1] se traduit aussi par d'importants changements morphologiques des cellules N111G lorsqu'elles forment un feuillet de cellules confluentes. Ce phénotype particulier des cellules N111G se traduit par une réorganisation du cytosquelette d'actine et peut être reproduit en stimulant avec l'Ang II des cellules HEK-293 exprimant le récepteur AT[indice inférieur 1]. Nous avons montré que l'adoption d'un tel phénotype est dépendant de l'activation de la protéine Rho-kinase. Encore une fois, l'EXP3174 s'est révélé efficace pour prévenir et renverser l'adoption du phénotype des cellules N111G. En somme, ces résultats suggèrent que l'activation constitutive des voies de signalisation sous-jacentes au récepteur N111G-AT[indice inférieur 1] force la cellule à s'adapter en modifiant son phénotype.