| Summary: | L'épissage alternatif des ARN pré-messagers est une modalité importante régissant l'expression des gènes chez les eucaryotes supérieurs. Outre la contribution des signaux d'épissage, la sélection des sites d'épissage est souvent contrôlée par d'autres éléments présents dans l'ARN pré-messager. Cependant, la nature de ces séquences, l'identité des facteurs s'y liant et les mécanismes d'action demeurent encore mal connus. Afin d'étudier les séquences régulatrices et les facteurs cellulaires pouvant contrôler l'épissage alternatif chez les mammifères, notre laboratoire utilise le gène hnRNP A1.L'exclusion ou l'inclusion de l'exon 7B dans l'ARN pré-messager de hnRNP A1 permet de produire deux ARN messagers encodant respectivement la protéine hnRNP A1 et hnRNP A1B. Les séquences introniques flanquant l'exon alternatif 7B contiennent plusieurs régions hautement conservées chez l'humain et la souris suggérant un rôle important joué par ces régions. Notre laboratoire a identifié quatre de ces régions influençant l'épissage alternatif de l'exon 7B. Le but de mon étude était de caractériser un [i.e. une] nouvelle région intronique, CE9, située en aval de l'exon 7B.L'élément CE9 a la capacité de moduler l'épissage in vitro et in vivo . Les résultats obtenus indiquent que CE9 est un régulateur négatif affectant l'utilisation d'un site d'épissage 3' . Contrairement à la majorité des régulateurs négatifs connus, l'élément CE9 n'empêche pas la reconnaissance du site d'épissage 3' car la liaison du snRNP U2 et du snRNP U4 a toujours lieu malgré l'inhibition de l'épissage. Plusieurs évidences suggèrent que l'activité de CE9 est médiée par une protéine: CE9 agit sur divers substrats, l'ajout d'ARN compétiteur correspondant à CE9 rétablit le profil d'épissage affecté par la présence de CE9, et l'élément CE9 forme un complexe spécifique avec des protéines dans un extrait cellulaire.L'utilisation d'une chromatographie par affinité a permis d'isoler la protéine SRp30c. SRp30c est capable d'interagir de façon spécifique avec CE9 et promouvoit la répression de l'épissage seulement lorsqu'un ARN pré-messager contient CE9. Ces résultats suggèrent une contribution de la protéine SRp30c dans la fonction de l'élément CE9. Cette étude a permis d'identifier pour la première fois une séquence intronique réprimant la sélection d'un site d'épissage 3' commun. De plus, le rôle de la protéine SRp30c dans la fonction de CE9 est la première fonction spécifique associée à cette protéine. Cette découverte démontre la versatilité des membres des protéines SR dans la régulation de l'épissage alternatif.
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