Présence des jonctions de type gap dans les cellules endothéliales et les cellules du muscle lisse vasculaire humaines et leur contribution à la modulation du calcium intracellulaire

• Main Author: Hassan, Ghada Shawki
• Other Authors: Bkaily, Ghassan
• Language: French
• Published: Université de Sherbrooke 2001
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4147

L'interaction entre les cellules endothéliales (CEs) et les cellules du muscle lisse vasculaire (CMLVs) joue un rôle important dans la modulation du tonus vasculaire. Ce dialogue entre les deux types de cellules peut être médié par des facteurs relâchés par les CEs et les CMLVs, ou par une communication physique directe via les jonctions de type gap. L'objectif de notre étude est de tester les hypothèses suivantes: (1) le contact physique entre les cellules endothéliales (CE) et du muscle lisse vasculaire (CMLV) module le Ca[indice supérieur 2+] intracellulaire ([Ca][indice inférieur i]) de ces cellules; (2) cette modulation s'effectue via une communication à travers les jonctions gaps et (3) l'augmentation du [Ca][indice inférieur i] par l'ET-1, un facteur relâché dans le système vasculaire, peut être transférée entre les cellules couplées via des jonctions intercellulaires. Afin de vérifier ces hypothèses, nous avons testé: (1) l'effet du contact physique entre les cellules en culture pure et en co-culture sur le niveau basal calcique des CEs et des CMLVs; (2) la présence des sous-unités des jonctions de type gap; (3) la capacité de ces jonctions de permettre le passage de molécules de faible poids moléculaire ainsi que; (4) l'effet de l'ET-1 sur le transfert du calcium entre des cellules en contact. En utilisant la technique de mesure du [Ca][indice inférieur i] dans les CEs aortiques humaines ou les CMLVs en culture, nos résultats démontrent qu'en co-culture de CE-CMLV, le contact physique entre les deux types de cellules semble induire une augmentation significative du [Ca][indice inférieur n] des CEs sans affecter le niveau basal du [Ca][indice inférieur i] des CMLVs. De plus, l'utilisation de la technique d'immunofluorescence indirecte suggère la présence des jonctions gaps formées surtout de Cx40 dans les CEs et les CMLVs aortiques humaines. En utilisant la technique de double marquage d'un groupe de cellules, les cellules donneuses avec la sonde fluorescente de faible poids moléculaire, la calcéine, et un autre groupe avec la sonde membranaire fluorescente, la DiI, nos résultats démontrent que les jonctions entre les CEs, entre les CMLVs ainsi que entre les deux types cellulaires permettent le transfert intercellulaire de molécules de faible poids moléculaire. De plus, en utilisant la technique de balayage rapide par microscopie confocale, nous avons montré la propagation d'une vague calcique entre deux CEs en contact en réponse à l'ET-1. Nous avons aussi démontré, à l'aide de la technique de l'immunofluorescence indirecte et d'anticorps dirigés contre l'ET-1, la présence de ce peptide dans nos CEs et CMLVs d'aorte d'origine humaine. Nos résultats suggèrent donc que le niveau élevé du [Ca][indice inférieur i] observé dans les co-cultures de CEs-CMLVs peut être modulé par la formation de jonctions gaps entre les deux types de cellules, un phénomène qui peut avoir d'importantes implications dans des maladies vasculaires telle l'athérosclérose, et que la réponse calcique à l'ET-1, un facteur impliqué dans l'athérosclérose, peut se propager entre des cellules en contact.