| Summary: | La télomérase est une ribonucléoprotéine à transcriptase inverse essentielle au maintien des télomères, extrémités des chromosomes eucaryotes. Les télomères sont des éléments essentiels pour assurer la stabilité et l'intégrité des chromosomes puisque plusieurs protéines s'y lient et forment un capuchon protecteur au bout du chromosome, le protégeant ainsi contre la dégradation et les fusions bout-à-bout qui pourraient survenir et causer plusieurs problèmes, incluant la mort cellulaire. Chez la levure Saccharomyces cerevisiae, plusieurs études ont identifié les éléments essentiels au fonctionnement de la télomérase. Ainsi, on a déterminé que la molécule d'ARN TLC1 ainsi que la protéine Est2p, sous-unité catalytique de la télomérase, formaient le complexe enzymatique minimal pour la fonction de la télomérase in vitro . Par contre, les protéines Est1p, Est1p et Cdc13p s'ajoutent au complexe minimal pour former un holoenzyme fonctionnel in vivo. Toutes ces protéines sont essentielles in vivo et si l'une d'elles est manquante, la cellule est vouée à la mort cellulaire après quelques générations dû au raccourcissement graduel des télomères à chaque division cellulaire. Dans cette étude, nous présentons différents projets qui ont pour but de caractériser de façon biochimique l'holoenzyme de la télomérase et de l'étudier dans son état natif. De plus, un nouveau mécanisme de régulation de la télomérase est proposé et se fait via la ribonucléase III Rnt1p. Les résultats obtenus suggèrent que Rntlp agit à titre de régulateur négatif de la télomérase et ceci dans une période précise du cycle cellulaire. Rntlp diminuerait l'expression des sous-unités de la télomérase pour ainsi réguler son activité. Par ailleurs, dans le but d'étudier les aspects biochimiques de la télomérase et d'identifier de possibles partenaires inconnus, nous avons entamé la purification de l'holoenzyme dans son état natif.La purification s'est avérée plus difficile que prévu et n'a pas donné les résultats escomptés. Finalement, toujours dans l'optique d'étudier la télomérase dans son état natif (sans l'utilisation d'étiquettes protéiques), nous avons entamé un projet d'expression et de purification d'une portion d'une des sous-unités de la télomérase, Est1p, dans le but d'élever des anticorps. Cette purification s'est effectuée en bactéries, à l'aide du système de la protéine de fusion GST. Il s'est avéré que la purification du fragment de la protéine Est1p nécessitait plusieurs étapes de purification plutôt que la méthode classique de purification à l'aide de l'étiquette GST.
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