Construction et utilisation de substrats phagiques de la protéase de l'adenovirus type 2

• Main Author: Choto, Carlos
• Other Authors: Weber, Joseph
• Language: French
• Published: Université de Sherbrooke 1997
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3118

Les adénovirus produisent une protéase qui est essentielle au développement de particules virales infectieuses. Cette cystéine protéase accomplit cette tâche en clivant ses substrats aux sites consensus, soit (M,I,L)XGXG ou (M,I,L)XGGX. Pour augmenter la sensibilité d'un test enzymatique, nous avons construit un substrat peptidique exposé à la surface d'un phage filamenteux. L'activité enzymatique, donc, peut être mesurée par titrage des phages ayant perdu un épitope distal au site de clivage. La construction de substrats phagiques m'a permis, après le développement d'une méthodologie appropriée, de tester et de comparer leur clivage par différentes formes et préparations de la protéase Ad2. Dans un premier temps, l'effet de la protéase Ad2, de la trypsine et de la subtilisine sur l'infectivité des substrats phagiques a confirmé l'absence d'un clivage non spécifique. Par la suite, le clivage spécifique des substrats phagiques a été testé avec des préparations de protéase Ad2 purifiées et non-purifiées. Ce test a non seulement démontré l'importance évidente de la pureté sur l'efficacité du clivage, mais aussi une différence de clivage spécifique entre le substrat phagique porteur d'une séquence de clivage pour l'Ad2 et celui sans séquence de clivage. Finalement et malgré le peu de sensibilité atteinte par ce test, sa versatilité est telle qu'on peut éventuellement espérer l'utiliser comme test d'activité de la protéase Ad2.