Étude du rôle des isoenzymes de la PKC dans l'adhésion des lymphocytes T aux cellules endothéliales

• Main Author: Gravel, Serge
• Other Authors: Dupuis, Gilles
• Language: French
• Published: Université de Sherbrooke 1996
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3101

La PKC constitue une famille d'isoenzymes, possédant une activité Ser/Thr kinase, dont douze isoformes ont été décrits jusqu'à présent. Il est maintenant clairement établi dans la littérature que les isoformes de la PKC possèdent des fonctions biologiques différentes. Cependant, dû à l'absence d'inhibiteurs spécifiques pour ces isoformes, il a été difficile jusqu'à tout récemment de déterminer leurs rôles particuliers. L'utilisation de la technologie antisens a apporté une approche nouvelle à ce problème. Cette technique repose sur le fait que l'expression d'une protéine peut être inhibée par l'hybridation d'une séquence nucléotidique complémentaire à I'ARNm encodant la protéine. Nous avons utilisé cette technique, ainsi que des essais de surexpression afin d'étudier le rôle de la PKC α dans deux aspects importants du processus permettant de cibler les leucocytes au site d'infection ou de lésion: (1) l'expression des molécules d'adhésion ICAM-1 et VCAM-1 par les cellules endothéliales; (2) la réorganisation des filaments d'actines chez les cellules endothéliales. Pour ce faire, nous avons sous clone l'ADNc complet de la PKC α dans les orientations sens (pour la surexpression) et antisens (pour diminuer l'expression) dans un vecteur d'expression eucaryote et transfecte ces constructions dans la lignée de cellules endothéliales humaines ECV 304. Des lignées stables ont été générées par une sélection au G418. L'analyse Western des transfectants a montré une diminution d'expression de la PKC α de 70 ± 25% dans la lignée de cellules transfectées avec la construction antisens et une surexpression de 36 ± 25% dans les cellules transfectées avec la construction sens. Cependant, il est impossible de conclure que les variations de niveaux d'expression observées sont dues à l'expression des constructions puisque la procédure expérimentale n'a pas été faite de façon assez rigoureuse. D'autre part, il est impossible d'associer les phénotypes étudiés (expression des molécules d'adhésion ICAM-1 et VCAM-1 et l'état des fibres de stress) à l'expression de la PKC α puisque les modifications observées pourraient très bien être dues à des modifications aléatoires entre les différentes populations et non à des différences d'expression de la PKC α.