| Summary: | Τόσο τα βλαστικά όσο και τα προγονικά κύτταρα συντονίζουν τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση για να δώσουν γένεση στον κατάλληλο αριθμό λειτουργικά εξειδικευμένων κυττάρων κατά την οργανογένεση. Διαφορετικές πειραματικές προσεγγίσεις ανέδειξαν τον ρόλο της πρωτεΐνης Geminin στη διατήρηση των προγονικών κυττάρων, τη συμμετοχή της στις αποφάσεις καθορισμού της αναπτυξιακής τους τύχης αλλά και την συμβολή της στην οργανογένεση. Αν και ο ακριβής μηχανισμός δεν είναι ξεκάθαρος, η Geminin φαίνεται να επηρεάζει την κατεύθυνση του πολλαπλασιασμού έναντι της διαφοροποίησης. Για να διαλευκανθεί ο ρόλος της Geminin in vivo στην κυτταρική διαίρεση και διαφοροποίηση των προγονικών κυττάρων, δημιουργήθηκαν ποντίκια που στερούνται την έκφραση της Geminin ειδικά στα κύτταρα της λεμφοειδούς σειράς μέσω Cre ανασυνδυασμού.
Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η απουσία της Geminin έχει ελάχιστες επιπτώσεις στην ανάπτυξη και διαφοροποίηση των θυμοκυττάρων ενώ τα ώριμα περιφερειακά Τ κύτταρα που δεν εκφράζουν Geminin εμφανίζουν πολλές επιπτώσεις στον πολλαπλασιασμό μετά από in vitro ενεργοποίηση. Τα φυσικά φονικά κύτταρα (Natural Killer Cells) αναπτύσσονται στο μυελό των οστών από κοινά αρχέγονα κύτταρα και καθορίζονται από την ικανότητά τους να σκοτώνουν καρκινικούς στόχους χωρίς προηγούμενη ενεργοποίηση. Τα κύτταρα αυτά παίζουν σημαντικό ρόλο στις μη ειδικές αποκρίσεις και πέρα από την ισχυρή κυτταροτοξική δράση έναντι ευαίσθητων κυττάρων-στόχων χαρακτηρίζονται από την ικανότητα να απελευθερώνουν διάφορες κυτταροκίνες αποκρινόμενα άμεσα σε ενδοκυτταρικές μολύνσεις. Επιπρόσθετα, αποτελούν έναν κρίσιμο κυτταρικό πληθυσμό για την προστασία των ιικών μολύνσεων, καθώς αναγνωρίζουν με ειδικό τρόπο ιικά μολυσμένα κύτταρα και τα σκοτώνουν απευθείας. Για τους λόγους αυτούς παρουσιάζει ενδιαφέρον ο έλεγχος των τυχόν επιπτώσεων της απουσίας της Geminin στα ΝΚ κύτταρα.
Με βασικό πειραματικό εργαλείο την κυτταρομετρία ροής, μελετήσαμε την αναπτυξιακή πορεία των φυσικών φονικών κυττάρων απουσία της Geminin. Σε κυτταρικά εναιωρήματα από σπλήνα και μυελό των οστών από Fl/koCD2Cre και Fl/WT πειραματόζωα, NK1.1+TCRβ- ΝΚ κύτταρα αναλύονται με κυτταρομετρία ροής για τον έλεγχο της έκφρασης μορίων-δεικτών των ώριμων ΝΚ κυττάρων. === The interplay of proliferation and differentiation is essential for normal development and organogenesis. Stem cells as wells as progenitor cells coordinate these cellular decisions to give rise to the appropriate number of differentiated cells with specific function. Geminin was identified through two parallel lines of investigation as both a regulator of DNA replication and a regulator of differentiation of neural cells. In order to address the in vivo role of Geminin in regulating progenitor cell self-renewal and differentiation decisions in different cellular systems, have been generated mice that allow the conditional inactivation of the mouse Geminin gene in cells giving rise to the lymphoid lineage.
Natural Killer Cells are lymphocytes of the innate immunity with effector function such as perforin-dependent cytotoxicity and interferon-γ secretion. Several lines of evidence implicate them in the early control of virus infection, in tumor immunoserveillance and in the regulation of immune responses. Mature NK cells express a wide variety of cell surface receptors that enable them to recognize targets expressing low surface amounts of major histocompatibility complex class I molecules or high surface amounts of molecules induced by stress or microbial molecules. NK cells generation occurs in the bone marrow from hematopoietic stem cells.
In this study, we shed light to the in vivo role of Geminin in the development and differentiation of Natural Killer Cells. Cell suspensions from bone marrow and spleen from Fl/koCD2Cre mice that lack Geminin expression in the lymphoid lineage and Fl/WT mice that serves as controls were analyzed with flow cytometry. NK1.1+TCRβ- ΝΚ cells were analysed for surface receptors, markers of mature NK cells.
|
|---|
