Sélection visuelle basée sur un phénotype migratoire, isolation et caractérisation de cellules uniques métastatiques
La caractérisation d’échantillons biologiques s’effectue très souvent au microscope optique. Or, il est techniquement difficile d’isoler quelques cellules rares parmi une culture hétérogène en se basant strictement sur des caractéristiques observables au microscope, comme la localisation, la morp...
| Main Author: | |
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| Other Authors: | |
| Format: | Others |
| Language: | fra |
| Published: |
2021
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| Subjects: | |
| Online Access: | http://hdl.handle.net/1866/25197 https://orcid.org/0000-0001-5338-8780 |
| Summary: | La caractérisation d’échantillons biologiques s’effectue très souvent au microscope optique.
Or, il est techniquement difficile d’isoler quelques cellules rares parmi une culture hétérogène
en se basant strictement sur des caractéristiques observables au microscope, comme la localisation,
la morphologie ou le déplacement, car il n’existe pas nécessairement de marqueur
moléculaire unique qui leur sont associés. Afin de répondre à cet enjeux, le laboratoire dans
lequel j’ai effectué mon stage de maîtrise a récemment développé la Single Cell Magneto Optical
Capture (scMOCa), qui utilise des réactifs communs et un laser de faible puissance pour
attacher des billes ferromagnétiques à la membrane plasmique cellulaire et permet d’isoler
magnétiquement les cellules d’intérêt.
Le présent ouvrage rapporte l’application de la scMOCa à la migration de cellules métastatiques
ainsi que les adaptations apportées à la technique nécessaires à la réalisation
du projet. Notamment, le volume de cellules uniques capturé a été augmenté d’un facteur
d’environ 250 grâce à l’automatisation de la technique et à l’étude du photoblanchiement
de la fluorescéine, phénomène à la base de la scMOCa. Brièvement, l’expérience consiste à
capturer les cellules uniques présentant les phénotypes migratoires les plus importants, définis
par l’analyse de leur trajectoire, parmi une culture hétérogène de cellules métastatique.
Les résultats de l’expérience démontrent une conservation des phénotypes migratoires après
plusieurs mitoses. Aussi, l’expression génétique relative fait ressortir des gènes et groupes de
gènes propres à la migration cellulaire. === The characterization of biological samples depends heavily on the optical microscope. However,
it is technically challenging to isolate rare cells among a heterogeneous culture solely
based on visual inspection at the microscope. Indeed, characteristics like location, morphology
or displacement do not necessairly have specific related molecular markers. In order
to solve this issue, the laboratory where I accomplished my master internship developped
the Single Cell Magneto Optical Capture (scMOCa) wich uses commun reagents and a low
powered laser to attach ferromagnetic beads on the cell plasma membrane and isolate the
cells of interest with magnetic tools.
The present work reports the application of scMOCa to the metastatic cell migration and
the implemented adaptations to the technique in order to carry out the project, especially
by increasing the number of single cells being isolated by a factor of 250. This adaptation
requiered the study of photobleaching, phenomenon at the foundation of scMOCa. Briefly,
the experiment consists to capture the cells presenting the most important migratory phenotypes,
defined by their track analysis, among a heterogeneous metastatic cell culture. The
experimental results show that the migratory phenotypes are preserved after several cell divisions.
Also, the relative gene expression highlights some genes and gene groups owned to
cellular migration. |
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