Le rôle de l'Epoxyde hydrolase soluble (sEH) dans la physiopathologie des calcifications vasculaires

• Main Author: Varennes, Olivier
• Other Authors: Amiens
• Language: fr
• Published: 2018
• Subjects: Acides époxyeicosatriénoïques; Calcifications vasculaires; Epoxide Hydrolase soluble
• Online Access: http://www.theses.fr/2018AMIE0046/document

L'Epoxide Hydrolase soluble (sEH) est une enzyme exprimée dans les vaisseaux. Elle possède un domaine hydrolase à l'extrémité COOH-term (sEH-H) qui métabolise des facteurs vasodilatateurs et anti-inflammatoires comme les acides époxyeicosatriénoïques (EETs). Elle possède également un domaine phosphatase à l'extrémité NH2-term (sEH-P) dont le rôle biologique n'est pas totalement élucidé. Afin de comprendre le rôle de sEH-H et sEH-P dans la calcification vasculaire, des anneaux aortiques de rats et des cellules musculaires lisses vasculaires humaines (CMLVh) ont été exposés à des conditions procalcifiantes pendant 7 et 14 jours respectivement. Le N-acétyl-S-farnesyl-L-cystéine (AFC), un inhibiteur de sEH-P, et le trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-)cyclohexyloxy) acide benzoïque (t-AUCB), un inhibiteur de sEH-H, ont été utilisés entre 0,1 et 10 μM. En condition procalcifiante, l'AFC réduit de façon dose-dépendante la calcification vasculaire. Au contraire, le t-AUCB augmente de façon dose-dépendante la minéralisation au sein des anneaux aortiques. Une augmentation de l'activité TNAP a été observée dans les surnageants de culture des anneaux aortiques avec le t-AUCB. Sur les anneaux désendothélialisés ou sur les cultures de CMLVh, les inhibiteurs n'ont pas d'effet sur la calcification, soulignant le rôle crucial joué par les facteurs endothéliaux métabolisés par la sEH. L'ensemble de nos résultats montrent que l'inhibition pharmacologique de la sEH-H augmente la calcification vasculaire in vitro en augmentant la biodisponibilité des EETS. Au contraire, l'inhibition de la sEH-P protège contre la calcification vasculaire à travers un mécanisme dépendant de l'endothélium === Expressed in the vasculature, soluble epoxide hydrolase (sEH) exhibits a COOH-terminal hydrolase domain metabolizing endothelial vasodilator and anti-inflammatory factors like epoxyeicosatrienoic acids (EETs) and, a NH2-terminal phosphatase domain whose biological role remains unclear. To assess the role of sEH phosphatase and hydrolase domains in vascular calcification, rat aortic rings and hVSMCs were exposed to procalcifying culture media for 7 and 14 days, respectively. N-acetyl-S-farnesyl-L-cysteine (AFC), an inhibitor of the phosphatase domain, and trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-cyclohexyloxy)-benzoic acid (t-AUCB), a hydrolase domain inhibitor, were used at concentrations ranging from 0.1 to 10 μM. Under procalcifying culture condition, AFC significantly and dose-dependently reduces aortic calcification. Conversely, addition of t-AUCB results in a significant and dose-dependent increase in aortic calcification in rats, without modification of tissue viability. A concomitant increase in TNAP activity was observed in supernatants of aortic rings cultured in the presence of t-AUCB. On de-endothelialized aortic rings or hVSMCs cultures, both inhibitors had no significant effect on the calcification process, pointing out the crucial role played by endothelial factors metabolized by sEH in the control of this biomineralization process. Together, our data demonstrates that pharmacological inhibition of sEH hydrolase increases vascular calcification in vitro by majoring the bioavailability of endothelium- derived EETs. Contrarily, the inhibition of sEH phosphatase is protective against vascular calcification through an endothelium-dependent mechanism.