Imagerie quantitative du traffic intracellulaire de VIH-1

• Main Author: Lysova, Iryna
• Other Authors: Strasbourg
• Language: en
• Published: 2017
• Subjects: Protéin de nucléocapside; Transcription inverse; Pseudovirus; Étiquette tetracystéine; Internalisation dans le noya; PALM; Microscopie electronique; Nucleocapsid protein; Reverse transcription; Tetracystin label; Internalization in nucleus; Electron microscopy; 572.8; 616.91; 616.97
• Online Access: http://www.theses.fr/2017STRAJ092

La protéine de nucléocapside du VIH-1 (NCp7) joue un rôle important dans plusieurs étapes du cycle viral. Ses interactions dans l’environnement intracellulaire dans les conditions proches d’une vraie infection sont peu décrites. L’objectif de ce projet de thèse a été de développer des approches d’imagerie permettant de suivre la NCp7 au cours des étapes précoces du cycle viral directement dans les cellules infectées. En analysant l’intensité des pseudovirus fluorescents nous avons montré un effet de « dequenching » de fluorescence témoignant d’une diminution de la concentration en NCp7 au sein des particules virales, résultant très probablement du relargage des molécules de nucléocapside à partir des complexes viraux. Ces résultats montrent pour la première fois la libération de la NCp7 dans le cytoplasme lors de la transcription inverse. Les pseudovirus NCp7-TC ont ensuite été imagés en haute résolution par microscopie PALM. Les images de distribution de la NCp7 marquée ont révélé la présence de la NCp7-TC à l'intérieur du noyau. Nous avons mis en evidence par microscopie électronique la presence de la NCp7-TC à proximité de pores nucléaires. === The nucleocapsid protein of HIV-1 (NCp7) plays an important role in several stages of the viral cycle. Its interactions in the intracellular environment under conditions close to true infection are not well described. The objective of this thesis project was to develop imaging approaches to monitor NCp7 during the early stages of the viral cycle directly in infected cells. By analyzing the intensity of the fluorescent pseudoviruses, we showed a fluorescence "dequenching" effect indicating a decrease in the NCp7 concentration within the virus particles, most likely resulting from the release of the nucleocapsid molecules from the viral complexes. These results show for the first time the release of NCp7 into the cytoplasm during reverse transcription. The pseudoviruses NCp7-TC were then imaged in high resolution by PALM microscopy. The distribution images of labeled NCp7 revealed the presence of NCp7-TC within the nucleus. We have demonstrated the presence of NCp7-TC in the vicinity of nuclear pores by electron microscopy.