Salmonellapåvisning i kyckling med hjälp av polymerase chain reaction

• Main Author: Sadeqi, Atefa
• Format: Others
• Language: Swedish
• Published: 2021
• Subjects: Salmonella; enterobacteriaceae; polymerase chain reaction; validera; kycklingproven; konfirmering.; Medical Biotechnology; Medicinsk bioteknologi
• Online Access: http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:mau:diva-43070

Salmonella är en gramnegativ bakterie som tillhör gruppen Enterobacteriacea. Bakterien delas in i två arter S. enterica och S. bongori och totalt har mer än 2600 serotyper upptäckts. Dessa serotyper skiljs från varandra utifrån sina flagellära H-antigener och somatiska O-antigener. Salmonellos är ett exempel på ett sjukdomstillstånd som orsakas av olika salmonella typer. De flesta salmonellainfektioner hos människor sker genom konsumering av kontaminerade livsmedel med bakterien. Polymerase chain reaction, PCR, är en snabb metod som kan detektera bakterier i till exempel livsmedel. I metoden används omväxlande upphettning och nedkylning av PCR-proven. Reaktionen i PCR sker i ett antal steg som möjliggör bildning av många kopior av DNA efter bara 40 cykler. Syftet med denna studie var att validera PCR metoden genom att hitta olika koncentrationer av salmonella i 25 gram värmebehandlad kycklingprov. Metoden börjades med att inokulera kycklingproven med salmonella och de bestämda halterna var 100, 10 och 1 cfu/prov. Huvudfokus var att hitta 1 cfu/kycklingprov och för att uppnå målet gjordes därför totalt fyra försök för att kunna dra pålitliga resultat och slutsatser. Vid varje försök gjordes två metoder parallellt där den ena var PCR metoden medan den andra var referens till PCR och genomfördes bara genom odling på agarplattor. Positiva prover bekräftades genom konfirmering i ett antal steg och vid varje försök gjordes negativ kontroll för att undvika falsk positiva resultat. Resultatet visade att 100 cfu/prov och 10 cfu/prov i kycklingprov kunde detekteras med PCR. Det närmaste värdet till 1 cfu/prov som var målet, blev 0,8 cfu/prov och med denna bakteriehalt lyckades PCR detektera två positiva prover av totalt tre prover. Den låga bakteriehalten behöver därför upprepas flera gånger för att metoden ska kunna valideras.