Utveckling och utvärdering av ett fidelitetssystem för DNA polymeraser

• Main Author: Bjurheden, Eva
• Format: Others
• Language: Swedish
• Published: Karlstads universitet, Fakulteten för teknik- och naturvetenskap 2011
• Online Access: http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:kau:diva-7178

En publicerad metod för undersökning av noggrannhet hos DNA polymeraser har undersökts. Metoden bygger på in vitro replikation av lacZα genen i pUC18 och identifiering av mutationer genom blå vit selektion efter transformation av reaktionsprodukten. I arbetet visas att framställning av templatet till polymerasreaktionen kan göras enligt beskrivning, men att utbytet blev lågt. Polymerasreaktionen med det framställda templatet fungerade även det enligt beskrivning men mängden erhållen produkt var för liten för att ge kolonier efter transformationssteget. Innan metoden kan användas behövs tillgång till större mängder templat för polymerasreaktionen. En möjlighet att förbättra utbytet är en bättre procedur för extraktion av det önskade fragmentet ur agarosgel.   === A published method for testing the accuracy of DNA polymerases has been evaluated. The method is based on in vitro replication of the lacZα gene in pUC18 and identification of mutations by blue white selection for transformation of the reaction product. It was shown that the production of the template for the polymerase reaction can be done by the protocol, but the yield was low. The polymerase reaction with the prepared template worked as described, but the amount of product obtained was too small to give colonies after the transformation. Before the method can be used, larger amounts of template for the polymerase reaction are needed. One possibility to improve the yield is a better procedure for the extraction of the desired fragment from the agarose gel.