Utveckling av en PCR-baserad metod för detektion av plasmidburna kolistinresistens, mcr-1 och mcr-3 gener i extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producerande enterobacteriaceae

• Main Author: Ahmed, Aden
• Format: Others
• Language: Swedish
• Published: Högskolan Kristianstad, Sektionen för lärande och miljö 2018
• Subjects: Kolistin; mcr-gener; ESBL-producerande Enterobacteriaceae; annealingtemperatur; PCR; Biomedical Laboratory Science/Technology; Biomedicinsk laboratorievetenskap/teknologi
• Online Access: http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:hkr:diva-17928

Kolistin är ett gammalt polypeptidantibiotikum och används som sista utväg för behandling av allvarliga infektioner orsakad av multiresistenta gramnegativa bakterier. Nya studier har påvisat kolistinresistensgener, mcr (mobil colistin resistance), hos extended spectrum beta-lactamase (ESBL)-producerande Enterobacteriaceae. Mcr-genen ligger i plasmider som kan överföras mellan bakterier, vilket innebär att det är mycket svårare att behandla människor och djur vid infektion orsakad av patogen som erhållit denna resistens. Syfte med detta projekt var att utveckla en PCR-baserad metod för detektion av mcr-1 och mcr-3 gener. I denna studie optimerades en PCR-metod och sedan screenades 60 ESBL-isolat från Kristianstads vattenrike. Därefter undersöktes PCR-produkt med hjälp av agarosgelselektrofores. Resultatet visade att 51oC är den optimala annealingtemperaturen vid multiplex-PCR för detektion av mcr-1 och mcr-3. Ingen av mcr-generna kunde detekteras i de 60 ESBL-isolaten. Positiva kontrollstammar med specifika primers kunde detekteras i PCR-analyser som genomfördes i denna studie, vilket tyder på att den optimerade PCR metoden kan vara pålitlig för detektion av mcr-1 och mcr-3 generna.