Metodutveckling för att studera dysferlin i neutrofila granulocyter

• Main Author: Jacobsson, Jennifer
• Format: Others
• Language: Swedish
• Published: Högskolan i Borås, Institutionen Ingenjörshögskolan 2010
• Subjects: dysferlin; neutrofila granulocyter; FACS; konfokalmikroskop; Engineering and Technology; Teknik och teknologier
• Online Access: http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:hb:diva-20080

De neutrofila granulocyterna ingår i det icke specifika immunförsvaret och fagocyterarmikroorganismer och rester från kroppens egna celler. Neutrofilen innehåller fyra olika typerav granula, som vid aktivering av cellen kan uppregleras till plasmamembranet. Proteinetdysferlin har bevisats förekomma i membranet i en del av dessa granuler. Det tros ha en roll imembran fusion och underhåll av membranet.Dysferlin är ett transmembrant protein av typ II, och proteinet saknas i funktionellt tillståndvid sjukdomstillstånden Limb-Girdle muskeldystrofi 2B och Miyoshi myopati. I arbetetkommer en metod att utvecklas som skall användas till att studera proteinet dysferlin hos deneutrofila granulocyterna vid olika funktionella tillstånd. Mängden dysferlin iplasmamembranet hos oaktiverade och aktiverade celler jämförs också i arbetet.Antikroppar har använts för att märka in dysferlinet. En primär antikropp som binder tillproteinet och en sekundär antikropp som binder till den primära. Den sekundära antikroppenhar en fluorescent färg konjugerad. För analyserna har en FACS som ger diagram överfluorescenssignalen använts och ett konfokalmikroskop som avbildar cellen i olika skikt, vilkakan användas för att ta fram en tredimensionell bild av cellen.Både intracellulär och extracellulär inmärkning av dysferlin har gjorts och olika parametrarhar varierats mellan försöken. FACS analyserna har visat på att dysferlin möjligtvis skullekunna finnas i små mängder i plasmamembranet hos oaktiverade celler. Mängden dysferlin iplasmamembranet ökar vid aktivering av cellen, till följd av uppreglering av granula. Studier ikonfokalmikroskopet har visat på att dysferlin finns i cellmembranet hos aktiverade celler ochatt det finns lokaliserat till cytoplasman hos oaktiverade celler.