| Summary: | Orientador: Raquel Mantuanelli Scarel Caminaga === Resumo: Estudos realizados por nosso grupo investigaram polimorfismos no gene Interleucina 8 (IL8) em 500 indivíduos com e sem periodontite e identificaram que o haplótipo ATC/TTC conferiu 2 vezes maior suscetibilidade à doença periodontal crônica (DP) em comparação com o haplótipo ATT/TTC. Estudos clínicos revelaram que indivíduos portadores do haplótipo no gene IL8 associado à DP, mesmo com baixo desafio microbiano, desenvolviam periodontite de maneira mais exacerbada quando comparados aos indivíduos portadores do haplótipo não associado à DP. No entanto, a funcionalidade biológica desses haplótipos no gene IL8 ainda não foi investigada por meio de controlados ensaios in vitro. A proposta deste estudo é avaliar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL8 em células imunes, incluindo a investigação por meio da regulação da expressão do gene repórter presente em plasmídeos recombinantes construídos artificialmente (constructos). Foi coletado sangue periférico de pacientes que carregam cada haplótipo e estimulados com mediadores inflamatórios e bactérias periodontopatogênicas para se avaliar a expressão gênica (mRNA, RT-qPCR), proteínas secretadas (Multiplex), perfil fenotípico celular (Citometria de fluxo), fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) por macrófagos (Citometria de fluxo) e potencial de migração de linfócitos e neutrófilos. Constructos contendo cada haplótipo foram transfectados em linfócitos T humanos (células JM) e a expressão do gene repórter GFP fo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) === Abstract: Studies by this group investigated polymorphisms in the Interleukin 8 (IL8) gene in 500 individuals with and without periodontitis and identified that the ATC/TTC haplotype conferred 2-fold increased susceptibility to periodontal disease (PD) compared to the ATT/TTC haplotype. Clinical studies showed that individuals with IL8 haplotype associated with PD, even with low microbial challenge, responded in a more exacerbated manner when compared to individuals with not susceptible haplotype. However, the biological functionality of these haplotypes in the IL8 gene was not investigated by in vitro controlled assays. . The purpose of this study is to evaluate the functionality of haplotypes in the IL8 gene in immune cells including the investigantion of gene reporter expression present in the recombinant plasmids constructed artificially (constructs). Peripheral blood was collected from patients from each haplotype and stimulated with inflammatory mediators and periodontopathogenic bacteria to evaluate the gene expression (mRNA, RT-qPCR), secreted proteins (Multiplex), cellular phenotype profile (flow cytometry), phagocytosis and reactive oxygen species (ROS) by macrophages (flow cytometry) and migration potential of lymphocytes and neutrophils. Constructs containing each haplotype were transfected into Human lymphocytes (JM cells) and expression of the GFP reporter gene was evaluated using flow cytometry. The individuals with the susceptible haplotype (ATC / TTC) had higher levels... (Complete abstract click electronic access below) === Doutor
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