| Summary: | Orientador: Willian Fernando Zambuzzi === Resumo: Embora algum progresso tenha sido alcançado nos últimos anos, ainda são necessários estudos capazes de desvendar os mecanismos moleculares envolvidos com o fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR) em células tumorais. Com esta finalidade, estabelecemos o perfil quinômico (através do microarranjo de peptídeos, PepChip) das linhagens MCF7 e MCF7Res, fenótipo parental e resistente respectivamente, de células de câncer de mama. Os resultados obtidos pelo microarranjo de peptídeos e posteriormente, validados por western blotting, apontaram o envolvimento da via de sinalização Jak-Stat e isoformas de PKC no processo de resistência das células de câncer de mama. Além disso, mostramos envolvimento de p42/44-mapk, Ras e um aumento na expressão de MMP-9. Estes resultados mostram o potencial agressivo destas células resistentes, visto que estas vias estão envolvidas em mecanismos responsáveis pela proliferação e invasão celular. Como as proteínas Jak1 e Jak2 mostraram-se envolvidas, decidimos avaliar níveis de fosforilação de Stats 1, 2, 3, 5 e 6 e mostramos que todas estavam up-fosforiladas nas células resistentes. Baseado nestes resultados, decidimos avaliar através de um ensaio funcional, o papel de Jak2 no fenótipo resistente e, desta forma, avaliamos a viabilidade das células MCF7Res em pré-tratamento com 2 concentrações subtóxicas do inibidor de Jak2 (5µM e 10µM) e nossos resultados claramente mostraram que, inibindo Jak2, as células MCF7Res ficam mais sensíveis a daunorru... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) === Abstract: Although some progress has been achieved in recent years, it is still necessary studies to unravel the molecular mechanisms involved in multidrug resistance (MDR) phenotype in tumor cells. For this purpose, we established kinomic profile (by peptides microarray, PepChip) of MCF7 and MCF7Res lineages, parental and resistant phenotype, respectively, of breast cancer cells. The results obtained by microarray of peptides and subsequently validated by western blotting indicated the involvement of the Jak-Stat pathway signaling and PKC isoforms in the process of resistance of breast cancer cells. Furthermore, we show involvement of p42/44-MAPK, Ras and an increase in MMP-9 expression. These results show the potential of these aggressive resistant cells, since these pathways are involved in the mechanisms responsible for cell proliferation and invasion. As Jak1 and Jak2 protein shown to be involved, we decided to assess phosphorylation levels of Stats 1, 2, 3, 5 and 6, and show that all were up-phosphorylated in resistant cells. Based on these results, we decided to evaluate by a functional assay, Jak2 role in the resistant phenotype, and thus, evaluate the viability of MCF7Res cells pre-treated with 2 subtoxic concentrations of Jak2 inhibitor (5μM and 10μM) and our results have clearly shown that inhibiting Jak2, the MCF7Res cells become more sensitive to daunorubicin, increasing the rate of cell death forward the response to chemotherapy. Based on the results obtained by fosfoproteoma we conclude that the MDR phenotype involves specific metabolism in breast tumor cells, where PKCs isoforms and Jak-Stat signaling exercise prominent role. Thus, these data indicate the potential use of Jak2 inhibitors as a strategy for treatment of patients unresponsive to conventional therapies. === Mestre
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