| Summary: | Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico === Buddleja globosa Hope es una planta nativa de Chile que ha demostrado efectos analgésicos, antioxidantes, antiinflamatorio, antibacterianos y antifúngicos. En la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile se han realizado estudios que comprueban su actividad analgésica, antiinflamatoria y antioxidante. Además se han evaluado preparados farmacéuticos (crema y gel) en el tratamiento de eritrodisestesia palmo-plantar secundaria a terapia antineoplásica y radioepitelitis. Con estos antecedentes se propone la elaboración de un colutorio a base de un extracto de B. globosa para el tratamiento de mucositis oral, una enfermedad inflamatoria resultante de la terapia contra el cáncer, cuya incidencia es del 40-90% y se manifiesta como lesiones inflamatorias y/o ulcerativas del tracto oral y/o gastrointestinal. Este efecto secundario puede no sólo comprometer la salud de los pacientes que la presentan, sino también, la terapia a la que están sujetos. Hasta hoy no existe ningún producto aprobado para su uso en mucositis oral que haya demostrado eficacia en su prevención y/o tratamiento.
El objetivo general de este trabajo consiste en estandarizar un extracto alcohólico de hojas de B. globosa y evaluar mediante un ensayo preclínico la efectividad de un colutorio a base de dicho extracto estandarizado en sus componentes activos.
Para la elaboración del extracto etanólico semipurificado (EMAT) se utilizó material vegetal (hojas) recolectado en la Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago. Con el material seco y molido se realizaron extracciones seriadas con solventes de polaridad creciente (hexano, diclorometano y etanol).
La valoración de EMAT y colutorio se realizó por cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE) cuantificando los metabolitos verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina mediante curvas de calibración elaboradas con los respectivos patrones.
Se evaluó la estabilidad de EMAT y colutorio en estufa a 40°C y a temperatura ambiente.
Se realizó un estudio in vivo con Ratas hembras Sprague-Dawley, se estudiaron 7 grupos (control sano, control de mucositis, tratamiento de referencia (glutamina), colutorio al 1% EMAT vía oral, colutorio 5%EMAT vía oral, colutorio 1% EMAT vía tópica y colutorio 5% EMAT vía tópica) evaluando grado de mucositis, peso corporal y consumo de alimento. Además, se realizaron análisis histológicos a muestras de lengua.
La metodología CLAE permitió cuantificar los componentes principales (verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina) en EMAT (90,58± 1,377 ppm y 9,823± 0,131 ppm) y en las dos formulaciones elaboradas del colutorio, al 1% en EMAT (80,37± 4,454 ppm y 7,068± 0,3942 ppm) y al 5% en EMAT (325,1±9,668 ppm y 38,42± 1,367 ppm)
Con respecto a la estabilidad química de los compuestos activos del colutorio, se estableció que se produce degradación, llegando a un 8,09% de verbascósido al tercer mes en estufa a 40°C y 18,96% en el caso de 7-O-glucósido de luteolina. Mientras que en EMAT la concentración del verbascósido fue un 77,63% al cabo de tres meses en estufa a 40°C y el 7-O-glucósido de luteolina de un 82,24% respecto a la concentración inicial.
El colutorio a base de EMAT al ser un producto estandarizado en sus compuestos activos asegura la reproducibilidad lote a lote, la trazabilidad de la composición química del producto y por ende su acción farmacológica.
En el estudio in vivo no se observan signos físicos de desarrollo de mucositis oral en ningún grupo y no se observan diferencias estadísticamente significativas en el peso y consumo de alimento entre los grupos estudiados. Sin embargo, en el análisis histológico de mucosa lingual revela diferencias entre los grupos, principalmente en el grosor epitelial que se ve más delgado en los grupos de control de mucositis y tratamiento de referencia, no así en los grupos tratados con colutorios que se asemejan más al control sano.
En base a los resultados obtenidos en el estudio histológico, se encuentran evidencias que los colutorios al 1% y 5% en EMAT, tanto por vía oral como tópica, podrían ser efectivos en el tratamiento de la mucositis oral inducida por busulfán === Buddleja globosa Hope is a native plant from Chile that has shown analgesic, antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial and antifungal effects. In the Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile, studies that verify its analgesic, anti-inflammatory and antioxidant activity have been carried out. In addition, pharmaceutical formulations (cream and gel) have been evaluated in the treatment of palmar-plantar erythrodysesthesia secondary to antineoplastic therapy and radioepithelitis. With this background it is proposed the development of a mouthwash based on an extract of Buddleja globosa Hope for the treatment of oral mucositis, an inflammatory disease resulting from cancer therapy. Oral mucositis’ incidence is 40-90% and is manifested as inflammatory and/or ulcerative lesions of the oral and/or gastrointestinal tract. This side effect may not only compromise the health of the patients presenting it, but also the therapy to which they are subject. To the date there is no approved product in the treatment and/or prevention of oral mucositis that has been demonstrated efficacious.
The general objective of this work is to standardize an alcoholic extract of leaves of Buddleja globosa Hope and to evaluate, by a preclinical test, the effectiveness of a mouthwash based on this standardized extract in its active components.
For the elaboration of fractionated ethanolic extract (EMAT) plant material (leaves), collected in the Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago, was used. With the dry and milled material, serial extractions were carried out with increasing polarity solvents (hexane, dichloromethane and ethanol).
The analysis of the extract and mouthwash was performed by HPLC methodology, quantifying the metabolites verbascoside and luteolin 7-O-glucoside using calibration curves elaborated with the respective standards.
Stability of the extract and mouthwash was evaluated in an oven at 40 ° C and at room temperature.
An in vivo study was performed with 7 groups of female Sprague-Dawley rats (healthy control, mucositis control, standard treatment (glutamine), mouthwash 1% EMAT orally, mouthwash 5% EMAT orally, mouthwash 1% EMAT topically and mouthwash 5% EMAT topically) evaluating the degree of mucositis, body weight and food intake. In addition, histological analyzes were performed on tongue samples.
The HPLC methodology allowed quantification of the major components (verbascoside and luteolin 7-O-glucoside) in EMAT (90.58 ± 1.377 ppm and 9.823 ± 0.131 ppm) and in the two formulations of the mouthwash, 1% in EMAT (80, 37 ± 4.454 ppm and 7.068 ± 0.3942 ppm) and 5% in EMAT (325.1 ± 9.668 ppm and 38.42 ± 1.367 ppm)
Regarding the chemical stability of the active compounds of the mouthwash it was established that degradation occurs, reaching 8.09% verboscoside at the third month in an oven at 40 ° C and 18.96% in the case of luteolin 7-O- glucoside, while in the dry extract EMAT the concentration of verbascoside was 77.63% after three months in a stove at 40 ° C and luteolin 7-O-glucoside of 82.24% in relation to the initial concentration.
The EMAT-based mouthwash as a standardized product concerning its active compounds ensures batch-to-batch reproducibility, traceability of the chemical composition of the product and thus its pharmacological action.
In the in vivo study no physical signs of oral mucositis development were observed in any group and no statistically significant differences were observed in weight and feed intake among the groups studied; however, the histological analysis of lingual mucosa reveals differences between them, mainly in the epithelial thickness that was thinner in the control group of mucositis and standard treatment group, but not in the ones treated with mouthwashes, where a resemble to the healthy control group was observed.
Based on the results obtained in the histological study, there is evidence that 1% and 5% mouthwashes in EMAT, both orally and topically, could be effective in the treatment of oral mucositis induced by busulfan === 31/12/2018
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