| Summary: | Introducción. El estudio de hongos depende cada vez más de técnicas
moleculares modernas como Polimerase Chain Reaction (PCR). Muchos cultivos
microbianos son sometidos directamente a PCR, sin embargo, en levaduras, las
técnicas para extracción de ADN son combinadas con procedimientos laboriosos y
extensos para romper la pared celular. Recientemente, se ha descrito la técnica
FTA
®
(Flinders Technology Associated de Whatman), mediante la cual se colecta,
transporta, almacena y purifica ADN en forma simultánea. El objetivo de este
trabajo fue realizar un estudio comparativo de dos métodos de purificación de ADN
genómico de levaduras del género Cándida, y su aplicabilidad para el análisis por
la técnica de Random Amplified Polymorphic ADN mediante PCR (RAPD-PCR).
Material y Método. Se comparó un método convencional basado en la ruptura de
las paredes de levaduras con perlas de vidrio, combinado con extracción fenólica y
el método de purificación con cartas FTA
®
. Se purificó ADN genómico de 10 cepas
de C. albicans, el cual fue posteriormente sometido a la técnica de RAPD-PCR,
usando dos partidores diferentes. Para evaluar los resultados se analizó el
conjunto de amplicones, el índice de error de amplificación (IEA), el número total
de genotipos y la variabilidad genética se representó mediante un dendograma.
Resultados. Para todas las cepas analizadas, con el método convencional y el
partidor OPBA13 se obtuvo un único genotipo, un IEA = 0 y con el partidor
CaBUO1 2 genotipos y un IEA = 0,13. En cambio, con el método FTA, usando el
partidor OPBA13 se obtuvo 7 genotipos distintos, con un IEA = 0,55 y con el
partidor CaBUO1 las cepas mostraron 12 genotipos y un IEA = 0,9.
Conclusiones. Se observó que existen diferencias en el análisis de la variabilidad
genética de levaduras del género Candida, determinada por la técnica de RAPDPCR,
utilizando ADN genómico obtenido por el método convencional y por la
técnica que usa las cartas FTA. Se requieren análisis adicionales para optimizar
las condiciones de PCR con los filtros FTA. === Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista
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