人類巨細胞病毒之迅早期蛋白1-72調控葡萄糖調節蛋白78之機制研究
博士 === 國立清華大學 === 分子與細胞生物研究所 === 99 === 葡萄糖調控蛋白78 (GRP78) 在內質網逆境刺激反應調控扮演重要角色，並參與癌細胞的生長與病毒複製過程。然而，病毒調控GRP78的基因表達之機制未明。本論文研究提供一系列實驗證明，指出人類巨細胞病毒 (human cytomegalovirus) 之迅早期蛋白1-72 (IE1-72) 於病毒複製過程中調控GRP78基因之大量表達。IE1-72借由其三個功能區域—三磷酸腺苷結合區、鋅指區域與預測為亮氨酸拉鍊序列—調控GRP78的基因表現。此外，位在GRP78啟動子上的內質網逆境反應序列 (ERSE) 對IE1-...
| Main Authors: | , |
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| Other Authors: | |
| Format: | Others |
| Language: | en_US |
| Published: |
2010
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| Online Access: | http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/21172454201288105691 |
| Summary: | 博士 === 國立清華大學 === 分子與細胞生物研究所 === 99 === 葡萄糖調控蛋白78 (GRP78) 在內質網逆境刺激反應調控扮演重要角色，並參與癌細胞的生長與病毒複製過程。然而，病毒調控GRP78的基因表達之機制未明。本論文研究提供一系列實驗證明，指出人類巨細胞病毒 (human cytomegalovirus) 之迅早期蛋白1-72 (IE1-72) 於病毒複製過程中調控GRP78基因之大量表達。IE1-72借由其三個功能區域—三磷酸腺苷結合區、鋅指區域與預測為亮氨酸拉鍊序列—調控GRP78的基因表現。此外，位在GRP78啟動子上的內質網逆境反應序列 (ERSE) 對IE1-72的調控來說，也不可或缺。為進一步討論其機制，我們於大腸桿菌中表達並純化IE1-72，發現純化之IE1-72於試管中可與ERSE序列中的CCAAT區域結合。此發現指出IE1-72可能為去氧核醣核酸(DNA)結合蛋白。相關實驗更指出去除上述所提及的三個功能區域之變種IE1-72均使其喪失與ERSE結合的能力。此外，細胞內染色質免疫沈澱技術證明IE1-72確實與GRP78的啟動子結合，並伴隨著組蛋白乙醯基轉移酶TATA聯結相關蛋白1 (TAF1) 與GRP78啟動子之結合，及GRP78啟動子組蛋白4之甲基化增加—這些都使得啟動子的活性上升，而導致轉錄效率上升。另外，利用短髮夾RNA (small hairpin RNA) 技術抑制GRP78之表達，病毒DNA複製量亦隨之下降。這些結果首次顯示IE1-72可經由與DNA結合之機制直接調控GRP78啟動子而表達大量GRP78，最終促進病毒複製。
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