Importance of the amino acids at positions 299-308 of the tumor suppressor p53 molecule for nucleotide excision repair from the aspect of p53:XPB interaction

• Main Authors: Cheng, Chun-An, 鄭淳安
• Other Authors: Liu, Yin-Chang
• Format: Others
• Language: en_US
• Published: 2009
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/54602755398684230511

碩士 === 國立清華大學 === 分子醫學研究所 === 97 === 抑癌因子p53蛋白可以促進細胞修復UVC紫外線所造成的DNA損傷，並且增加照射輻射後的細胞存活率。核苷酸切除修復路徑(NER)是哺乳動物細胞去除UVC紫外線造成的DNA損傷的唯一途徑。p53可能藉由轉錄活化(transaction-dependent)或是非轉錄活化(transaction-independent)達成促進NER的功能。我們之前利用彗星分析法的研究指出p53於核萃取物(NE)去除紫外線導致的DNA損傷中扮演必要的角色。在此論文研究中，我們進一步確定p53蛋白是利用第299到308序列(LPPGSTKRAL)來參與此活性。利用彗星分析法發現，由這片段胺基酸所衍生而來的胜肽具有抑制核萃取物的切割核酸活性，並且在共同免疫沉澱分析中可見胜肽會干擾p53:XPB的交互作用。我們利用丙胺酸(Ala)來替代此片段中僅有的兩個帶正電胺基酸：離胺酸Lys (K)305和精胺酸Arg (R)306，以探討其重要性；發現此突變胜肽對於核萃取物的切割抑制作用降低。質體表現的P53點突變株也得到同樣結果。攜帶不同質體的細胞所萃取出的核萃取物皆顯示其切割活性降低。此結果說明帶正電的胺基酸在p53:XPB交互作用中扮演重要的角色。