The Subunit Vaccine Development and Antimicrobial Susceptibility Analysis of Haemophilus paragallinarum Taiwan-Isolated Strains

• Main Authors: Wei-Hao Chen, 陳偉豪
• Other Authors: Happy K. Shieh
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 2005
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/06715610405510541990

碩士 === 國立中興大學 === 獸醫微生物學研究所 === 93 === 雞副嗜血桿菌（Heamophilus paragallinarum）為引起雞傳染性可利查（infectious coryza）之病原菌，此為一台灣重要之雞傳染病。本研究之目的為利用免疫篩選方法篩檢雞副嗜血桿菌台灣強毒株A9（血清型C型）之基因庫，及製作台灣強毒株血清型C型與A型之刪減基因庫（subtraction library），藉此篩選雞副嗜血桿菌的毒力因子或其他具高抗原性的蛋白。本研究篩選所得之片段定序後確認為HagA（haemagglutinin antigen），而後利用E. coli表現系統大量表現完整之HagA重組蛋白（約58KDa）。經雞紅血球凝集試驗確認其功能性，並利用雞副嗜血桿菌高度免疫血清進行西方墨點法確認其抗原性。以HagA重組蛋白單獨或混和不活化全菌製成疫苗進行免疫試驗，並以臨床症狀、血球凝集抑制試驗與西方墨點法測定其保護力；以臨床症狀分析，不活化全菌疫苗添加HagA重組蛋白可增強約14﹪之保護力，單獨使用亦具71％之保護力，已達國家檢定標準；血球凝集抑制試驗結果顯示，抗體力價亦可提高約一倍；以免疫後之血清進行multiscreening 西方墨點法，發現血清型C型之免疫血清可辨識HP血清型A型與C型之HagA，顯示其可能具有交叉保護之能力。為確認更多血清型特異之基因片段，本研究亦比對刪減基因庫之96個片段，並經南方墨點法確認後，發現2個較具意義之基因片段，HctC與一putative transporsase，此DNA片段將極有可能提供更方便且準確的HP血清型檢測方式。 為了解台灣分離株之藥物敏感情況，本研究以1990年至2003年間分離於台灣中南部各雞場之野外菌株12株（血清型A型10株，C型2株）以瓊脂紙錠礦散試驗（agar disc diffusion test）進行藥物感受性分析，發現台灣分離株對於ampicillin、neomycin、kanamycin與streptomycin均具抗藥性，將所有分離株製作質體圖譜（the plasmid profile）並以限制酶分析，結果顯示12株台灣分離株中有8株均帶有一約5kb之質體（pYMH5）。經定序後發現其帶有strA 基因 （基因產物為aminoglycoside phosphotransferase）、sulII基因（基因產物為dihydropteroate synthase）、aphA1基因（基因產物為aminoglycoside (3') phosphotransferase APH (3')-Ia），以及mbeCy基因（基因產物為mobilization protein）與複製起始位（replication origin RSF1010）之基因、此為首次發現於雞副嗜血桿菌之質體，且在其他細菌中亦尚未出現。