Study of snake venom proteins that affect integins-mediated platelet functions

• Main Authors: Liu, Chao-Zong, 劉朝榮
• Other Authors: Huang, Tur-Fu
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1996
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/59257007463310000511

博士 === 國立臺灣大學 === 藥理學研究所 === 84 === Disintegrins 是一類廣泛存在於出血性蛇毒中低分子量蛋白的總稱。它 們對於血小板細胞膜上的醣蛋白 IIb/IIIa 有很高的親和力。經由佔據在 醣蛋白 IIb/IIIa ，disintegrins 可以阻礙纖維蛋白原與醣蛋白 IIb/ IIIa 的結合，進而抑制了血小板的凝集。利用流動細胞螢光技術的直接 染色法，接上螢光物質 FITC 的 disintegrins 可以很簡便的就檢測出血 小板細胞膜上醣蛋白 IIb/IIIa 的量，而且只需很少量的檢體、在很短的 時間內就可以完成分析。 7E3 單源抗體的基因工程產物 chimeric 7E3 Fab 即將上市成為臨床上抗血栓的藥物。由於抗血栓的效果和出血的副作 用與 chimeric 7E3 Fab 佔據血小板細胞膜上醣蛋白 IIb/IIIa 的多寡有 關，因此，如果能夠監測血小板細胞膜醣蛋白 IIb/IIIa 被單源抗體所結 合的程度，將有助於提升 chimeric 7E3 Fab 的臨床療效以及降低出血的 副作用。目前最常用來檢測血小板醣蛋白 IIb/IIIa 被 7E3 抑制的程度 是利用 125I 標定的 7E3。藉由 125I-7E3 所能結合到血小板醣蛋白 IIb/IIIa 的量間接反映出醣蛋白 IIb/IIIa 被 7E3 所結合的程度。這個 方法必須在富含血小板血漿的檢體中進行。而且放射性物質的操作及廢料 的處理均不方便。另外，有人利用活化血小板會引起吸附有纖維蛋白原之 小球的凝集來定量醣蛋白 IIb/IIIa 被 7E3 所抑制的程度。這種方法雖 然簡單，但是依然無法確切知道醣蛋白 IIb/IIIa 被 7E3 所佔據的量。 利用流動細胞螢光技術偵測飽和濃度 FITC-crotavirin，disintegrins 的一個成員，所能結合到血小板的量，我們很容易的就可以間接得知醣蛋 白 IIb/IIIa 被 7E3所結合的程度。這個方法只需 5ul 的全血就可以 在 30 分鐘內完成分析。美西小草原響尾蛇 ( Crotalus viridis ) 蛇毒 中存在一個選擇性抑制 collagen 引起血小板凝集的蛋白，crovidisin。 經由結合到 coll- agen，crovidisin 可以阻礙 collagen 與血小板細胞 膜上醣蛋白 Ia/IIa的接觸，進而抑制了collagen 所造成的血小板活化和 凝集。 Disintegrins are a group of snake venom proteins which inhibit human platelet aggregation by acting as glycoprotein IIb /IIIa antagonists. They bind to glycoprotein IIb/IIIa on platelet membrane with a very high affinity. Using flow cytometry with direct staining, the binding of FITC-disintegrins to platelets could be easily determined. The blockade of platelet membrane glycoprotein IIb/IIIa by a monoclonal antibody, 7E3, was measured by flow cytometry using a fluorescein isothiocyanate- conjugated disintegrins, FITC- crotavirin, as the probe. The content of glycoprotein IIb/IIIa for the subsequent binding of FITC-crotavirin to the 7E3- pretreated platelets highly correlated to the extent of glycoprotein IIb/IIIa remained available. This indicates that the percentage inhibition of FITC-crotavirin''s binding reflects the extent of glycoprotein IIb/IIIa blockade by 7E3. This technique may provide an alternative rapid method for measuring the blockade of glycoprotein IIb/IIIa by 7E3, a promising anti- thrombotic agent. A selective inhibitor, named crovidisin, of collagen- induced platelet aggregation was purified to homogeneity from the venom of Crotalus viridis snake. Through binding to collagen fibers, crovidisin blocks the interaction between platelets and collagen fibers, resulting in the blockade of collagen-mediated platelet functions such as adhesion, release reaction, thromboxane formation and aggregation.