| Summary: | 碩士 === 國立陽明大學 === 微生物暨免疫學研究所 === 81 === YM-1是以旋毛蟲口服感染小白鼠十五天後由其腹水滲出細胞所分泌的結晶性蛋白，
且在正常小鼠骨髓細胞亦有表現，經純化知其分子量為45kDa (kilo dalton) 。藉
由蛋白質微量定序所得到之113 個氨基酸序列設計DNA 聚合脢鏈鎖反應引子 (PCR
primers)在小白鼠腹水滲出細胞之cDNA基因庫中進行DNA 聚合脢連鎖反應(Polyme-
rase chain reaction, PCR) 合成特定探針，篩選小鼠活化腹水滲出細胞之cDNA基
因庫得到不同的clones含有YM-1部份的基因，利用其中二個部份重疊且含有氨基端
分泌訊息胜的質體 PEC-21 及 PEC-15 。構築含有YM-1蛋白質完整轉譯區(Open
Reading Frame)的質體PEC-28，經DNA 序列分析知其具一完整轉譯區含有398 個氨
基酸，其中前21個氨基酸序列經電腦分析可能為一分泌訊息胜。
為利用基因轉殖方式表現YM-1蛋白以pSV-Poly, pAcBSdHHd 為表現載體，分別送入
哺乳類細胞株COS-7 及昆蟲細胞株Sf21表現，結果顯示利用昆蟲桿狀病毒載體表現
系統成功地在昆蟲細胞株Sf21表現YM-1蛋白，產生的YM-1蛋白在分子量及與抗YM-1
蛋白血清反應均和腹水滲出細胞所分泌的YM-1蛋白相同；並且可被運送至細胞外，
顯示YM-1蛋白其氨基端之分泌訊息胜可為昆蟲細胞Sf21辨認及修剪。
由YM-1氨基酸序列和蛋白質資料庫中已知蛋白質之比較發現YM-1與馬來西亞絲蟲之
幾丁質分解酵素具有35﹪相似性。
利用不同方法(Agar plate Assay, native PAGE method, PA/HPLC method)偵測腹
水滲出細胞中及利用基因轉殖技術所發生的YM-1蛋白質是否具有幾丁質分解酵素活
性。顯示並無明確的結果支持YM-1蛋白質具有幾丁質分解酵素之活性。利用幾丁質
及其衍生物glycol chitin 以腹腔注射小白鼠誘導腹水滲出細胞聚集，發現在第四
天細胞數目達最高峰(3.25×107 cells/mouse) ，YM-1蛋白質之合成仍遠小於寄生
蟲誘導模式所產生之YM-1量。
是否在小白鼠基因庫中存在另外形式的YM-1基因是具有活性，或是需有其它附屬因
子一起作用才有活性，則需進一步實驗才可得知。
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