Facile Cloning , Sequencing and Expression of .delta.

• Main Authors: Yu, Chih-Wen, 尤志文
• Other Authors: Chiou, Shyh-Horng
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1993
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/99762604730401065874

碩士 === 國立臺灣大學 === 生化科學研究所 === 81 === .delta. 水晶體蛋白是存在於鳥類和爬蟲類眼球中的主要水晶體蛋白。為 了快速選殖定序鵝之.delta.水晶體蛋白基因,於是便利用簡易快速的PCR 技術從鵝眼球水晶體cDNA混合液中,將.delta. 水晶體蛋白基因增殖。然 後將增殖產物接上pUC19載體, 殖入大腸桿菌JM109中繁殖。篩選後,取三 個含有約1.4kb插入基因的菌落予以核酸定序。結果得到一條1,401bp完整 的.de -lta.水晶體蛋白基因,包含了466個胺基酸序列。在與其他鳥類. delta. 水晶體蛋白胺基酸序列比較後,發現有很大的相似性。其分別與鴨 之.delta.1 ,.delta.2水晶體蛋白有97%,94%相似性;與雞之.delta.1,. delta.2 水晶體蛋白有88%,90%相似性;與鴿子之.delta.水晶體蛋白有88% 相似性;而與人之精氨琥珀酸分解酵素只有69%相似性。因藉由陰離子交換 樹脂純化出來的鵝 .delta.水晶體蛋白具有與鴨.delta. 水晶體蛋白相當 的精氨琥珀酸分解酵素活性。而有高相似胺基酸序列的雞與鴿子.delta. 水晶體蛋白卻無此活性。為進一步研究分析,便將得到的鵝.delta.水晶體 蛋白基因接上pQE31表現載體,於大腸桿菌M15中大量表現,並對表現產物特 性予以探討。