The research of the high affinity kainate binding sites in fish cerebellum

• Main Authors: Yu Hung Hsiang, 游宏祥
• Other Authors: Chang Yen Chung
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1993
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/71171837780202834276

碩士 === 國立清華大學 === 生命科學研究所 === 81 === L-glutamate是脊椎動物中樞神經系統主要的興奮性神經傳導遞質,以L- glutamate為受器的蛋白依電生理及藥理學的方法可分為不同的次型.由過 去研究的知道與kainate有高親和力的受器次型, 簡稱kainate受器,在較 低等的動物如魚, 蛙, 雞的腦中含量較多, 且主要分佈在小腦的 molecular layer.由Tong et al.的論文(Tong, C. G., Pan, M. P., and Chang, Y. C. Neuroscience 49, 237-246, 1992)知道, 吳郭魚小腦 有一類高親和性 kainate結合中心, 其分佈及藥理學特性, 與Willard et al. (Willard, J. M., Ziegra, C. J., and Oswald, R. E. J. Biol. Chem. 266, 10196-10200, 1991)在金魚腦中 找到和G protein有 關的kainate結合蛋白類似,然而這類高親和kainate結合中心與L- glutamate的結合能 力卻不強 (kd值為136 uM), 反而與外來的化合物如 domoic acid, kainate, CNQX (6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3- dione), DNQX(6,7-dinito- quinoxaline-2,3-dione)有較強的結合能 力. 因此本篇論文探討的第一個問題是研究高親和性kainate結合中心的 內生性結合物(endogenous ligand ), 經過陽離子交換樹脂, 逆相碳-18 樹脂的高效率低壓液態層析管柱 (reverse phase c-18 HPLPLC column), 以及逆相碳-18樹脂的高效率液態層析管柱(reverse phase c-18 HPLC column)仔細分析腦部萃取物, 發現腦中除了glutamate找不到 能與這類結合中心更有效的結合物, 所以高親和性kainate結合中心很可 能仍以glutamate 為內生性的結合物. NO(nitric oxide)是近年來發現的 一種具神經傳導遞質功用的氣體分子, NO可由arginine經NO Synthase的 催化而產生, 其作用之一包括活化 guanylate cyclase而產生高量的 cGMP. NO Synthase在老鼠腦中主要分佈在小腦的molecular layer及 granule cell layer, 而NO所引發的cGMP含量增高主要發生在小腦的 molecular layer. 因此本篇論文探討的第二個問題為是否NO Synthase會 經由高親和性kainate結合中心活化. 在高親和性 kainate結合中心可作 用的濃度下,魚小腦切片中cGMP的濃度並沒 有明顯的升高, 可能魚小腦中 NO Synthase的活化並不是透過高親和性kainate結合中心所達成的.