The Effects on Human Red Blood Cells and Platelet by sphingomyelinase of Bacillus cereus

• Main Authors: Wang Lai, 王來
• Other Authors: Wang Cheng Teh
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1993
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/71053601459193228335

碩士 === 國立清華大學 === 生命科學研究所 === 81 === Bacillus cereus為一種會分泌溶血素(hemolysin)的革蘭氏陽性產孢桿菌 。能產生三種不同的溶血素, 分別是 cereolysin,cereolysin AB和 hemolysin BL。cereolysin AB 乃是由磷脂酵素 sphingomyelinase 與 phosphatidyl- choline phospholipase 組成, 其作用機制在於水解細胞 膜上的磷脂質。Sphingomyelinase 是 Bacillus cereus所分泌的溶血素 之一,可將sphingomyelin水解成phospho- choline 及 ceramide 。溶血 素的特徵是它會破壞正常細胞的細胞膜, 高量的溶血素使細胞破裂分解; 而低量的溶血素則會影響到細胞膜正常的構造。當細胞膜被sphingo- myelinase 擾動後,膜上的受器是否還有正常的功能,其中牽涉到蛋白質與 脂質的交互作用。本研究是先純化 Bacillus cereus 的溶血素,將 Bac illus cereus於Tryptic soybean broth 培養 6 小時,經鹽析沉澱( salting out),陽離子交換樹脂管柱層析法( CM Sephadex C-50),陰離子 交換樹脂管柱層析法 ( Q Sepha- rose fast flow ) , 膠體管柱層析法 ( Sephadex G-100 superfine ), 高效液相層析等過程可得一分子量 36 KDa之sphingomyelinase。再以此酵素作用在人類紅血球與血小板上,來探 討 sphingomyelinase對它們的影響。結果發現: 被酵素作用的紅血球與 血小板在形態都會變成圓球型。在血小板功能上的影響則是 sphingomyelinase 會抑制 collagen 所引起的血小板凝集;並減慢 thrombin 刺激血小板反應之凝集初速, 但並不抑制凝集百分比。 Sphingo- myelinase 對 ADP+fibrinogen 刺激血小板反應之影響則有促 進凝集的作用。對於 U46619 與 epinephrine 而言, sphingomyelinase 則不影響它們刺激血小板的反應。 此外sphingomyelinase 也會抑制PGI2 所引起血小板 cAMP之增加,以及抑制collagen所引起之47 KDa蛋白之磷酸 化。