| Summary: | 碩士 === 國立陽明大學 === 遺傳學研究所 === 80 === GATA因子為具有組織特異性的 DNA binding protein，其DNA binding 部份為含有
Cys-Cys ，類似 Zn figer 的結構，近來由低等生物如 C.elegans (Elt-1) 、As-
pergillus (areA)也發現此一finger protein。而果蠅中則尚未有類似GATA-1的轉
錄因子被報導，而果蠅為研究組織特異性發展的最佳生物系統，故希望能找出果蠅
的GATA因子並研究GATA因子在果蠅發展中所扮演的角色。
我們利用PCR 的方法，由果蠅基因組中合成一段GATA因子上的DNA 序列，D1片段 (
94nt)。以此片段為探針，由果蠅的基因庫中，選殖出６個殖體(g1.1，g3.1，g4.2
，g5.1，g13.1，g15.2，再以g15.2為探針，從ICRF (Imperial Cancer Research
Fund) 提供的cosmid lihrary filters 中，篩選出４個殖體 (3G8，5G8，58C9，
88F8) ，由這些殖體核酸序列的分析中，我們確認了果蠅GATA因子之存在。且在
58C9.4殖體中發現了一個只含Ｃ端figer 的序列。
我們利用figer 區域的核酸序列，合成一些引子 (primer)NF，CF，與 CF，
分別從果蠅不同發育成長階段的cDNA基因庫做PCR 反應，找出有GATA1 因子mRNA表
現之基因庫 (embryo O-3hr、3-12hr、Ⅰ&Ⅱ instar) ，由這些 cDNA 基因庫中，
我們進一步篩選出８個殖體，其分別屬於 dGATA-1 (cDNA2, cDNA10, cDNA9.1) 與
dGATA-2 (cDNA4, cDNA11, cDNA14, cDNA13.1, cDNA13.3) ，經由比對核酸序列
的結果。dGATA-1 含有1800個核酸（cDNA序列並未完全），dGATA-2 含有3130個
核酸。
以13.3 (593)為探針，由cosmid lib22rary中選殖出４個殖體(41A3, 76D2, 78A9,
81G8) ，從限制圖譜，與 exon 定位中，可知dGATA-2 約有17kb長，且含有８個
exons 。
由polytene chromosome mapping 中，可知dGATA-1，dGATA-2分別位於果蠅染色體
的89B 區域與90D 區域。
經由初步的RNase protection assay與reverse transcriptase PCR 反應之研究，
可知不同的發育成長階段均具有二者mRNA之表現，然而表現量似乎有明顯的差異。
從二者cDNA的核酸序列中，我們構築了二個融合蛋白質，以製備抗體，其一pGEX
-13.3(3') ，從gel shift assay 的實驗中証實具有與DNA 結合之能力。其在大腸
桿菌中表現穩定且產量多，希望可由此更進一步，研究dGATA 蛋白質的結構，從而
了解dGATA 因子與DNA 結合的實驗狀態，並且找出dGATA 因子調控的下游基因。
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