The study of the interactions between p53 and its binding seqnence

• Main Authors: YUAN, ZHENG-NIAN, 袁正年
• Other Authors: LAI, MING-DE
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1992
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/04949732361632304429

碩士 === 國立成功大學 === 生物化學研究所 === 80 === p53 是一種抑癌基因(tumor suppressor gene) ，也就是說它失去功能就會導致細胞 變形(transformation)。原型p53 (wild-type p53) 的生理功能到目前為止仍然不清 楚。為了要了解它的生理功能，我們企圖決定它是一種轉錄因子(transcription factor) ，並且有兩項證據促使我們朝向這方面。首先，是有人研究出當p53 與另一 種DNA-binding polypeptide, GAL4 ，融合在一起後p53 具有轉錄活化的功能 (transactivation) 。其次，是有人發現到p53 會結合到一段特殊的DNA 序列上。因 此我們提出一個假說：p53 結合到此DNA 序列後，會活儘六某一個基因的表現。 我們使用PCR 的技術去選殖p53 可結合的DNA 序列(p53 binding site)，並且把它接 進含有tk promoter 的pBLCAT2 及不含tk promoter 的pBLCAT3 。將這些載體與p53 以calcium phosphate 的方式一起導入BHK (Baby Hamster Kidney) 細胞中48∼60小 時後收集細胞，並且分析細胞裡面CAT (Chloramphenicol acetyltransferase) 的量 以決定p53 對p53 binding site會產生何種反應？ 我們的結果顯示p53 binding site並不具有promoter的功能。然而卻意外發現原型 p53 可以抑制tk promoter ，但是突變p53 (Mutant p53)卻無法抑制。當p53 與含有 p53 binding site的載體一起導入BHK 後，抑制tk promoter 的作用可以獲得減緩。 而這種減緩現象並非經過競爭作用(competition) ，或者複製(replication) 來達成 的，顯示p53 可能是結合到p53 binding site後，會干擾到抑制tk promoter 的作用 或者也可能是轉錄活化的作用。由於前面所用的DNA fragment含有210bp ，無法排除 其他DNA 序列的影響。進一步，我們合成p53 結合DNA 序列的核心結合位置(core binding site) 。其結果與先前的p53 binding site的結果相同，顯示p53 直接經由 p53 binding site調節這種減緩現象的發生。