Cloning of the bone marrow derived leucocyle gene

• Main Authors: SUN,DE-SHAN, 孫德珊
• Other Authors: ZHANG,NAN-JI
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1990
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/65649815313616155543

碩士 === 國立陽明大學 === 生物學研究所 === 78 === YM-1是以Tichinella spiralis (Ts)口服感染雌性ICR 小白鼠15天後，由其腹腔滲出 細胞所分泌的單鏈結晶性蛋白質，分子量為45KD，同時其在骨髓細胞亦有表現。本研 究希望利用其抗體為工具，在骨髓細胞及腹腔滲出細胞之表現基因庫中選殖到YM-1的 基因。由其分子量推測其完整基因之長度，至少應有1.3kb。 我們先以YM-1之多源抗體去篩選骨髓之表現基因庫，得到K clone ，全長為560bps； 經DNA 序列分析，發現其部份序列與免疫超家族分子(Ig Supergene Family) 之基因 相類似。再以K clone 為探討，篩選同一表現基因庫，篩得一S cl;one，全長為885b ps。經DNA 序列分析，知S clone 包含完整之K clone 。為求選殖到完整之YM-1基因 ，重新建立了一個源於Ts感染所激發之腹腔滲出細胞之表現基因庫。再以Sclone為探 針，篩選得3 個clones，並鑑定其insert大小分別為1.1kb，1.1，2.3kb ，命名為P1 3，P12，P6 cione。由溶菌斑雜合反應得知，應為較S clonec長之新 lones。將以PC R 方式分別增殖後殖入載體(pBluecriptⅡ), 從已完成P13 及 P22 clone的一端 DNA 序列分析，知其與Sclone有重疊之處，且經轉譯成胺基酸後， P13 5’端較 S clone 多出39個胺基酸；待完成其他ciones之DNA 序列分析，將可獲知此基因之全長。 將已完成之 DNA序列共992bps所轉譯成之胺基酸序列，與YM-1蛋白質經微量序列鑑定 所得五段勝 鏈比較 (總共已知113 個胺基酸 )，尚無明顯相合之處。有待完整基因 序列定位後，才能鑑定由 K clon 選殖而得之基因確為YM-1或是僅輿YM-1具相同抗原 決定位(epitope) 之相關蛋白質。 另由轉譯所得Sclone之胺基酸序列，知其包含三個Leucine Zipper Pattern，且其二 次構造多為螺旋結構；此與文獻上已發表的Leucine Zippcr蛋白質相符合，且成為唯 一在一分子內具三個Leucine Zipper pattern之蛋白質。初步研判, 其可能為位於細 胞核內和DNA 結合之蛋白質, 負責基因轉錄之調控；或是位於細胞膜上，可與其他蛋 白質相互作用，負責物質進出之分子。