Studies on the secondary metabolites and their transforming enzymes in penicilium roqueforti

• Main Authors: LU, GING-YOU, 盧青佑
• Other Authors: WEI, YAO-HUI
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1988
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/87756628965517416364

碩士 === 國立陽明大學 === 生物化學研究所 === 77 === Eremofortin C（EC） 和PR毒素是藍酪黴菌的次級化謝產物，存在培養液中。EC已被 我們證實為PR毒素的前驅物，且由EC氧化來催化，此酵素反應產生過氧化氫，利用 過氧化（peroxidase）及o-dianisidine 偶合反應，可測得此酵素的活性。 EC氧化幾乎完全存在培養液中。我們收集培養液，並以polyfiber 超過濾濃縮，再 以８５％硫酸銨鹽析。沈澱出來的EC氧化分別以Fractogel HW 50 及高效能液態層 析管柱SW 300等分子篩層析後，再以SDS-polyacrylamide膠體電泳再純化，以活性染 色，找出具活性的蛋白質帶，切下後以電泳流洗器將EC氧化流洗出來。最終產物的 純度增加２１倍，比活性高達292unla/mg蛋白質。 EC氧化分子量為62,000 dalton 。它是醣蛋白，醣鏈佔整個蛋白質重量的６％。最 適PH值為５．６。在各種不同的PH值中極為穩定。最適反應溫度為５０℃。對於溫度 相當穩定，但超過６０℃後則急劇失活。此氧化對EC的Km值為8.2μM，而且有非常 高的基質特異性。 藍略黴菌適合生長在２４℃左右的溫度下，高於或低於２４℃均不利其生長。添加玉 米煮出液１０克、３０克、９０克，使EC產量分別增加５．１，６．２和６．７倍， 而PR毒素分別增加為３．３，４．６和４．９倍。在生長的第０、２、４、６、８天 添加玉米煮出液，我們發現EC毒素產量分別增加為４．６，３．７，２．８和２．２ 倍。這結果顯示越早添加玉米煮出液，對其EC及PR毒素產量的增加越顯著。並EC氧化 的活性也隨著玉米煮出液添加入培養液的濃度增加而增加。