A study of biosynthesis and secretion of a crystallizable protein (YM-1) from murine bone marrow-derived leukocytes

• Main Authors: XU, RUI-ZHOU, 徐瑞洲
• Other Authors: ZHANG, NAN-JI
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1986
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/02673187145550666253

碩士 === 國立陽明大學 === 微生物暨免疫學研究所 === 74 === YM－１是一種易結晶蛋白質，最早是在小白鼠口腔感染Trichinella spiralis（Ts） 後第１５天的腹腔滲出性細胞血清培養液（Serum free culture sup of peritoneal exudate cells ）中發現並純化的。其分子量約４５k ，是一單一鏈蛋白質，雖有分 子內隻硫鏈，但並無可偵測之N-link碳水化合物。 利用YM－１抗體作間接螢光染色（１．１F ）發現，YM－１陽性的附著性的附著性腹 腔滲出性細胞（YM－１+ adherent PECS ）首先出現在老鼠口腔感染Ts後第８天（ １０％），在第１５天達到頂點（１００％），然後下降，到了第１８天 adherent PECS中仍有３０％為YM－１陽性。 利用radioimmunoprecipitation（RIP ）作YM－１定量時發現，在感染Ts後不同天數 的巨噬細胞培養中，其細胞內或培養液中的TM－１產量是與PEC 中YM－１陽性細胞比 例成正比。因此感染後第十五天的YM－１產量達到最高，甚至到第２８天後仍可偵測 到少量YM－１。利用改變Culturesubstrum 或加入剌激劑（TPA，LPS等）或轉錄、傳 譯的抑制劑（Actinomycin D. Cycloheximide）作YM－１的Superinduction，但並無 明顯結果。 利用Puls-chase發現腹腔巨噬細胞YM－１分泌的half-max-imal release 長達６小時 ，此暗示YM－１分泌可走regulated pathway ，用calcium ionophore A ２３１８７ （甚至１０nm）造成細胞外鈣離子的influx，證明其確可加速YM－１分泌。事實上在 無細胞外鈣離子存在下，利用A ２３１８７ 動細胞內貯存的鈣離子就足以引起YM－ １大量分泌，而由於經Saponin permeabilized 巨噬細胞（PM），exogenous lnosi- tol-１，４，５－trisphosphate （Ins P ）並不能力速YM－１分泌。所以內質網 的Ca release對TM－１分泌是否絕對須要，有待更進一步證明。此外篩選了１１種與 C-a mobilization有關的荷爾蒙（insulin,serotonin 等），以試驗其是否可加速YM －１分泌，及是否有receptor在PM表面，但尚無具體結論。 YM－１陽性細胞很早即出現在老鼠胚胎的造血器官像fetal liver 及骨髓細胞中雖然 ６週大的正常老鼠其血液中的嗜中性白血球與５０％的骨髓細胞是YM－１陽性，但血 液中的單核球（monocyte）和resident巨噬細胞只有在Ts infection後才變為YM－１ 。事實上這種使immigrant 骨髓細胞或血液單核球聚積在腹腔並產生YM－１，是一種 普遍現象，除了在寄生蟲自然感染外，用一些非特異性irritant（thioglycollate， G-５０等）直接打入腹腔亦可產生。