| Summary: | Le VPH-16 de même que certains VPH, dont le VPH-18, causent le cancer du col
utérin. Son intégration dans le génome humain pourrait être un marqueur de
progression de l’infection.
Les charges virales totale et intégrée sont présentement mesurées en quantifiant par
PCR en temps réel les gènes E6 (RT-E6) et E2 (RT-E2-1) du VPH-16.
Nous avons évalué l’impact du polymorphisme du gène E2 sur la quantification de
l’ADN du VPH-16 dans des spécimens cliniques. Dans un premier temps, le gène
E2 de 135 isolats de VPH-16 (123 appartenaient au clade Européen et 12 à des
clades non- Européens) fut séquencé. Ensuite, un test de PCR en temps réel ciblant
les séquences conservées dans E2 (RT-E2-2) fut développé et optimisé.
Cent trente-neuf spécimens (lavages cervicaux et vaginaux) provenant de 74
participantes (58 séropositives pour le VIH, 16 séronégatives pour le VIH) ont été
étudiés avec les trois tests E2 (RT-E2-2), E6 (RT-E6) et E2 (RT-E2-1).
Les ratios de la quantité d’ADN de VPH-16 mesuré avec RT-E2-2 et RT-E2-1 dans
les isolats Européens (médiane, 1.02; intervalle, 0.64-1.80) et Africains 1 (médiane,
0.80; intervalle, 0.53-1.09) sont similaires (P=0.08). Par contre, les ratios mesurés
avec les isolats Africains 2 (médiane, 3.23; intervalle, 1.92-3.49) ou Asiatique-
Américains (médiane, 3.78; intervalle, 1.47-37) sont nettement supérieurs à ceux
obtenus avec les isolats Européens (P<0.02 pour chaque comparaison). Les
distributions des quantités de E2 contenues dans les 139 échantillons mesurées avec
RT-E2-2 (médiane, 6150) et RT-E2-1 (médiane, 8960) étaient statistiquement
différentes (P<0.0001).
Nous avons observé que les charges virales totale (odds ratio (OR) OR, 2.16 95%
intervalle de confiance (IC) 1.11-4.19), et épisomale du VPH-16 (OR, 2.14 95% IC
1.09-4.19), mais pas la présence de formes intégrées (OR, 3.72 95% IC 1.03-13.4),
sont associées aux néoplasies intraepitheliales cervicales de haut grade (CIN-2,3), et
ce, en contrôlant pour des facteurs confondants tels que l’âge, le taux de CD4
sanguin, l’infection au VIH, et le polymorphisme de VPH-16. La proportion des
échantillons ayant un ratio E6/E2 > 2 pour les femmes sans lésion intraépithéliale (7 de 35) est similaire à celle des femmes avec CIN-2,3 (5 de 11, p=0.24) ou avec CIN-
1 (4 de14, P=0.65).
Le polymorphisme du gène E2 est un facteur qui influence la quantification des
charges intégrées de VPH-16. === Episomal and integrated HPV-16 loads are currently estimated by quantitation with
real-time PCR of HPV-16 E6 (RT-E6) and E2 (RT-E2-1) DNA. We assessed the
impact of HPV-16 E2 polymorphism on quantitation of integrated HPV-16 DNA in
clinical specimens. First, HPV-16 E2 was sequenced from 135 isolates (123 from
European and 12 from non-European lineages). A novel assay targeting conserved
HPV-16 E2 sequences (RT-E2-2) was optimized and applied with RT-E6 and RTE2-
1 on 139 HPV-16-positive cervicovaginal lavages collected from 74 women (58
HIV-seropositive, 16 HIV-seronegative). Ratios of HPV-16 DNA copies measured
with RT-E2-2 and RT-E2-1 with European (median, 1.02; range, 0.64-1.80) and
African 1 (median, 0.80; range, 0.53-1.09) isolates were similar (P=0.08). Ratios
obtained with African 2 (median, 3.23; range, 1.92-3.49) or Asian-American
(median, 3.78; range, 1.47-37) isolates were greater than those with European
isolates (P<0.02 for each comparison). Distributions of HPV-16 E2 copies measured
in 139 samples with RT-E2-2 (median, 6150) and RT-E2-1 (median, 8960) were
different (P<0.0001). HPV-16 total (odds ratio (OR) OR, 2.16 95% confidence
interval (CI) 1.11-4.19), episomal (OR, 2.14 95% CI 1.09-4.19) but not integrated
(OR, 3.72 95% CI 1.03-13.4) load, were associated with high-grade cervical
intraepithelial neoplasia (CIN-2,3) after controlling for age, CD4 count and HIV,
and HPV-16 polymorphism. The proportion of samples with an E6/E2 ratio >2 in
women without SIL (7 of 35) was similar to that of women with CIN-2,3 (5 of 11,
P=0.24) or CIN-1 (4 of 14, P=0.65). E2 polymorphism was a factor that influenced
measures of HPV-16 integrated load.
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