| Summary: | Abstract 4E-T, a novel binding partner of eIF4E protein, transports 4E from the cytoplasm to the nucleus. This protein is also involved in mRNA degradation. 4E-T binds to eIF4E and carries eIF4E-protein along with the mRNA to P-bodies, which is the site of mRNA degradation. In this study, we show that 4E-T is a phospho-protein and is phosphorylated on multiple sites. We tried to identify some of the phosphorylation sites on this protein. By using overlapping PCR, a triple phospho mutant of this protein was made. We also investigated if 4E-T is phosphorylated by the S6 kinase (S6K). Our results indicate that even though 4E-T contains the phosphorylation motif of S6 kinase, S6K is not a kinase of this protein. Moreover, we examined if 4E-T phosphorylation on Ser213, 353 resides changes the interaction between this protein and 4E-HP. We could not find any evidence showing that the binding of these proteins together is dependent of phosphorylation of 4E-T on Ser213, 353 amino acids. Finally, we show that the interaction between 4E-T and 4E proteins is not regulated by phosphorylation. The Phospho-triple mutant of 4E-T protein can be used a strong tool to elucidate the function of this protein and how the interaction between this protein and its partners is regulated. === Résumé 4E-T, un nouveau partenaire de liaison à la protéine 4E, transporte 4E du cytoplasme au noyau. Il a aussi été démontré que cette protéine est impliquée dans la dégradation de l'ARNm. 4E-T lie 4E et la transporte, ainsi que l'ARNm, au P-bodies, site de la dégradation des ARNm. Ici, nous démontrons que 4E-T est une phosphoprotéine et qu'elle est phosphorylée en plusieurs endroits. Nous avons tenté d'identifier certains des sites de phosphorylation de cette protéine. En utilisant l'overlapping PCR, un phospho-mutant triple de cette protéine a été créé. Nous avons aussi vérifié si 4E-T est phosphorylée par la kinase S6 (S6K). Nos résultats indiquent que, même si 4E-T contient le motif de phosphorylation de la kinase S6, S6K n'est pas une kinase de cette protéine. De plus, nous avons examiné si la phosphorylation de 4E-T change l'interaction entre cette protéine et 4E-HP. Nous n'avons trouvé aucune preuve que la liaison de ces protéines entre elles serait phospho-dépendante. Finalement, nous démontrons que l'interaction entre 4E-T et 4E n'est pas régulée par la phosphorylation. Le phospho-mutant triple de 4E-T peut être utilisé comme un puissant outil pour élucider la fonction de cette protéine et comment l'interaction entre cette protéine et ses partenaires est régulée.
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