Devlopment of experimental tools to analyze the function of the TGF-beta-activated Kinase (TAK1) in neurons «in vivo and in vitro»

• Main Author: Forté, Stéphanie
• Other Authors: Philip A Barker (Internal/Supervisor)
• Format: Others
• Language: en
• Published: McGill University 2008
• Subjects: Biology - Neuroscience
• Online Access: http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=18723

The development of the nervous system requires the spatial and temporally controlled elimination of supernumerary neurons and their precursors. A balance between pro-survival and pro-death signals tightly regulates this programmed cell death, termed apoptosis. These signals can be executed by the c-Jun amino-terminal kinase (JNK) and nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) pathways, which either inhibit or activate the apoptotic machinery. An important activator of both JNK and NF-?B in the immune system is the TGF-beta-activated kinase (TAK1). To test whether TAK1 plays a similar role in the developing nervous system, we developed a genetic strategy to generate embryos with a neuron-specific deletion in Tak1. We also developed molecular tools to suppress TAK1 function in neurons in vitro and in vivo. By immunohistochemistry (IHC), we determined that TAK1 is expressed in all neuronal layers of the postnatal day (P)9 cerebellum. We also tested and optimized IHC protocols on paraffin-embedded embryos for different antibodies that could be useful for the analysis of the nervous system of mutant embryos. === L'élimination ciblée par apoptose de neurones excédentaires et de leurs précurseurs est nécessaire à l'organisation du système nerveux pendant le développement. Des facteurs de survie et des facteurs pro-apoptotiques influencent la survie des neurones. Ces signaux contrôlent l'activation des exécuteurs de l'apoptose à travers les voies de signalisation de la c-Jun amino-terminal kinase (JNK) et du nuclear factor-kappaB (NF-kappaB). Dans le système immunitaire, la kinase TGF-beta-activated kinase (TAK1) est un activateur central de ces voies de signalisation. Nous avons développé une stratégie pour tester l'hypothèse selon laquelle TAK1 jouerait un rôle similaire dans le système nerveux. Premièrement, nous avons tenté de supprimer TAK1 par délétion in vivo, plus particulièrement dans les neurones durant l'embryogenèse. Deuxièmement, nous avons développé des outils moléculaires pour tenter de supprimer TAK1 dans des neurones in vitro et in vivo. Par immunohistochimie (IHC) sur cervelets imprégnés de paraffine, nous avons déterminé que TAK1 était exprimée dans toutes les régions neuronales du cervelet en développement. Finalement, nous avons testé et optimisé des protocoles d'IHC sur embryons inclus en paraffine pour plusieurs anticorps qui pourraient être utiles pour l'analyse du système nerveux d'embryons mutants.