Characterization of Anp32 in Prolactin Signaling

• Main Author: Resalat-Panah, Nazila
• Other Authors: Suhad Ali (Supervisor)
• Format: Others
• Language: en
• Published: McGill University 2013
• Subjects: Biology - Molecular
• Online Access: http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=114174

Prolactin (PRL) and its downstream pathway Jak2/Stat5a are required for mammary gland developement and as well as differentiation of mammary alveolar structures. However, its role in breast carcinoma is still not fully understood. Some recent data including the one generated from our laboratory indicates that PRL may have a suppressive effect on breast carcinogenesis. To further investigate this matter, we performed micro array analysis to examine the PRL target genes in the mouse mammary epithelial cell line (HC11). Based on microarray analysis, we identified the gene Anp32, a small nucleo/cytoplasmic acidic protein, as a downstream target gene involved in PRL signaling. We further confirmed these results using quantitative PCR and western blot analyses. In addition, I have examined the contribution of this protein in regulating PRL signaling leading to activation of the Jak2/Stat5a pathway. The results illustrated that upon PRL stimulation, Anp32a undergoes phosphorylation and translocates to the nucleus. Unexpectedly, I found that PRL stimulation led to Anp32/Stat5 complex formation in mammary epithelial cells. We further confirmed this interaction using co-localization immunofluorescence confocal microscopy studies. Furthermore, using GST fusion proteins of various domains of Anp32 in in vitro association studies we illustrated that Stat5a interaction with Anp32a requires domains which present within both the N and C terminus of Anp32a. In a parallel analysis, to begin to examine the role of Anp32a in breast cancer, we examined the level of Anp32a expression in breast cancer cell lines. Our preliminary results exhibit a reduced expression level of Anp32a in highly metastatic mouse breast cancer cell line 4T1compared to Hc11 mammary cells. === La prolactin(PRL) et sa voie de signalisation en aval Jak2/Stat5a sont requies à la croissance de la glande mammaire, ainsi qu'à la différentiation des épithéliales mammaires. Cependant, le rôle de la PRL dans le développement du cancer du sein n'est pas encore clair. Quelques preuves récentes, obtenues par notre laboratoire, montrent que la PRL pourrait supprimer certains aspects de la carcinogenèse du sein. Par consequent, nous avons effectué une analyse de puce à ADN pour examiner les genes cibles de la en utilisant les cellules épithéliales mammaires de souris HC11. Sur la base de l'analyse micro-array, nous avons identifié la protèin Anp32a, une petite nuclèo- protein cytoplasmique acid comme une gene cible impliqué en aval de la voie de signalization de la PRL. Nous avons davantage confirmé ces résultats en utilisant la Reaction de polymerization en chaine (PCR) et l'analyse d'immunobuvardage de type western. En plus, nous avons examiné la contribution de cette protéine dans la régulation de la voie de signalisation de la PRL conduisant à l'activation de la voie Jak2/Stat5a. Les résultats ont montré que Anp32a est transloquée au noyau et deviant phosphorylée par la stimulation de la PRL. En plus, la kinase JAK2 est nécessaire pour la phosphorylation sur les tyrosines de Anp32a.De façon inattendue, nous avons constaté que la stimulation de la PRL conduit à la formation d'un complexe entre les protéines Anp32a/Stat5 dans les cellules épithéliales mammaires. En plus, nous avons confirmé cette interaction en observant la co-localisation par des études d'immunofluorescence par microscopie confocale. En outre, à l'aide des protéines de fusion de GST représentant différentes domains de Anp32 en utilisant des études d'association in vitro, nous avons illustré le fait que Stat5a nécessite les domains qui sont pré sent en N et C terminal. En parallèle, nous avons examiné le niveau d'expression de Anp32a dans les plusieurs lignées cellulaire de cancer du sein. Nos resultats preliminaries, présente un niveau d'expression réduite de Anp32a en cellules cancéreuse mammaires 4T1(hautement métastatiques) par rapport à les cellules épithéliales mammaires HC11.