| Summary: | Darbo tikslas – ištirti chromatografinės analizės sąlygas sirolimui ir takrolimui nustatyti HPLC-MS/MS metodu. Buvo išbandyti abu eliuavimo būdai (izokratinis ir gradientinis), mobiliosios fazės sudėtinėmis dalimis parinkus tirpiklius, remiantis literatūros duomenimis: metanolį ir vandeninį 0,2% acto rūgšties tirpalą. Gauti analizės chromatografiniai parametrai, esant izokratiniam eliuavimui, yra patenkinami, tačiau tolesni eksperimentai parodė gradientinio eliuavimo pranašumus. Išbandytas varijuojantis polinio tirpiklio parūgštinimas skruzdžių bei acto rūgštimis. Gauti rezultatai rodo, kad eliuento protonizacija analizės kokybei reikšmės neturi. Tačiau remiantis literatūros duomenimis nuspręsta palikti 0,1% skruzdžių rūgšties koncentraciją kraujo ekstraktų analizei. Taikant gradientinį eliuavimo būdą, buvo ištirtas analizės tiesiškumas: analizės jautrio priklausomybė nuo analitės koncentracijos mėginyje yra tiesinė tik vidinio etalono – askomicino ir takrolimo atvejais, o sirolimo atveju ši priklausomybė yra kvadratinė. Nustatyta, kad tai lemia chromatografinės sistemos nepusiausvyrumas esant naudotai mobiliajai fazei. Gauti geri analizės rezultatai, padidinus nepolinio eliuento hidrofobiškumą, pridedant į jį tetrahidrofurano (ypač esant gradientiniam eliuavimui). Pakeitus metanolį acetonitrilu, gauti nepalankūs rezultatai. === This study presents optimization of sirolimus and tacrolimus measurement in patients blood after renal transplantation by high–performance liquid chromatography with mass–spectrometry detection. In experiments with standart solutions of sirolimus and tacrolimus, using ascomycin as internal standart, chromatographical conditions were tested: type of eluation (isocratical and gradiental), properties of eluents (variable acidity of polar solvent and hydrophobity of nonpolar solvent), linearity of analysis. Patient blood extraction procedure was also tested. Sirolimus concentrations measured by HPLC-MS/MS method were 8-9 times lower as received by MEIA method. Both types of eluation were not sufficient for routine analysis in clinical laboratory, when eluents methanol and 0,2% acetic acid solvent were used. Gradiental eluation seamed to be better, but linearity analysis of sample series showed, that chromatographical system was not well-balanced. Methanol was changed to acetonitrile, but separation and retention time of analytes were even worse. Best results were obtained using mixture of methanol and tetrahydrofuran as nonpolar eluent.
|
|---|
