Seleção e caracterização de peptídeos recombinantes ligantes a anticorpos monoclonais reativos a proteínas de Anaplasma marginale

• Main Author: Cunha, Vanessa Rodrigues Borges da
• Other Authors: Goulart Filho, Luiz Ricardo
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Uberlândia 2016
• Subjects: Anaplasma marginale; MSP1; Genética molecular; Phage display; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
• Online Access: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15808

Bovine anaplasmosis is caused by Anaplasma marginale and A. centrale. The most pathogenic and important species for cattle production is A. marginale, and is widely distributed in tropical, subtropical and temperate regions of the world. A. marginale is an intra-erythrocyte rickettsia of susceptible ruminants, biological and mechanically transmitted by ticks and hematophagous insects. The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the main vector of A. marginale in Brazil. The congenital form of transmission in cattle may occur, causing the neonatal anaplasmosis. The outer membrane of A. marginale includes six well characterized major surface proteins, MSP1a, MSP1b, MSP2, MSP3, MSP4 and MSP5, which play important role in the development of the immune response of infected animals. In this study, we have used the Phage Display technology to identify specific peptides that were immunoreactive to monoclonal antibodies anti-A. marginale proteins. Peptide selection was performed using a subtractive selection of a peptide library with 12 random amino acids, Ph.D.-12, expressed on the surface of the M13 filamentous phage concurrently against the anti-MSP1a and anti-MSP2. After four rounds of selection and validation by ELISA, the selected peptides have recognized only the anti-MSP1. Analysis of bioinformatics identified 45 peptides, which showed the protein consensus sequence STxS that was represented in 78% of selected phages. Due to the multiple motif repeats found in MSP1 protein, the STSSxL motif may become an important biological target, with potential use in diagnostic tests and vaccine for the control of Anaplasma marginale. === Anaplasmose bovina é uma infecção causada por Anaplasma marginale e A. centrale. A espécie mais patogênica e de maior importância para bovinos é a A. marginale e está amplamente distribuída nas regiões tropicais, subtropicais e temperada do mundo. A. marginale é uma rickettsia intraeritrocitária de ruminantes susceptíveis, transmitido biológica e mecanicamente por carrapatos e insetos hematófagos. O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal transmissor de A. marginale no Brasil. A forma congênita de transmissão em bovinos pode ocorrer, ocasionando a anaplasmose neonatal. A membrana externa do A. marginale inclui seis proteínas principais de superfície (MSPs) bem caracterizadas, designadas de MSP1a, MSP1b, MSP2, MSP3, MSP4 e MSP5 e desempenham papel importante no desenvolvimento da resposta imune de animais infectados. Para o desenvolvimento deste estudo, foi utilizada a técnica de Phage Display para identificar peptídeos ligantes a anticorpos monoclonais reativos a proteínas de Anaplasma marginale a partir de bibliotecas de peptídeos recombinantes por meio da tecnologia Phage Display. Para seleção dos peptídeos foi realizado uma seleção subtrativa utilizando uma biblioteca de peptídeos com 12 aminoácidos randômicos, Ph.D.-12, expressa na superfície do fago filamentoso M13 concomitantemente contra os anticorpos anti-MSP1a e anti-MSP2. Após quatro ciclos de seleção e validação por ELISA, o conjunto de peptídeos selecionados apresentou ser unicamente reconhecido pelo anticorpo anti- MSP1. Análises de bioinformática identificaram 45 peptídeos, que apresentaram o motivo proteico consenso STxS, representado em 78% dos fagos seqüenciados. Devido aos múltiplos sítios repetidos encontrados na proteína MSP1, o motivo proteíco STSSxL pode ser um importante alvo biológico, com potencial utilização em ensaios diagnósticos e vacinais para o controle de Anaplasma marginale. === Mestre em Genética e Bioquímica