Efeito Tripanocida da L-Amino Ãcido Oxidase Isolada do Veneno da Bothrops marajoensis.

• Main Author: Ticiana Praciano Pereira
• Other Authors: Alice Maria Costa Martins
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2015
• Subjects: FARMACIA
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=14629

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior === FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà === Trypanosoma cruzi, o agente etiolÃgico da doenÃa de Chagas, continua a ser um problema de saÃde pÃblica nas AmÃricas. No presente estudo, foram avaliados os efeitos da L-aminoÃcido oxidase isolatada do veneno da Bothrops marajoensis (LAAOBmar) sobre todas as formas evolutivas do T. cruzi. A atividade antiparasitÃria foi avaliada atravÃs da cultura de parasitas tratados com diferentes concentraÃÃes da fraÃÃo em estudo. Epimastigotas foram cultivados em meio LIT, a 28ÂC na presenÃa LAAOBmar por 48 e 72 horas. Tripomastigotas foram obtidos a partir dos sobrenadantes de cÃlulas LLC-MK2 infectadas, ressuspensos em meio MEM com 2% de FBS e tratados durante 24 h. LAAOBmar mostrou uma atividade significativa contra epimastigota (CI50 48h = 6,31μg/mL; CI50 72 h = 5,85μg/ml) e tripomastigotas (CL50 24h = 0,17μg/mL) e diminuiu a sobrevivÃncia das formas amastigotas intracelular em cÃlulas LLC-MK2. A anÃlise do possÃvel envolvimento do perÃxido de hidrogÃnio foi realizada por adiÃÃo de catalase no meio, uma enzima que atua como retirador de H2O2. A morte celular mostrou que o efeito citotÃxico da LAAOBmar à reduzido, mas nÃo completamente abolido pela presenÃa da catalase. A anÃlise por microscopia confocal de epimastigota tratados com LAAOBmar mostrou coloraÃÃo com iodeto de propÃdio (IP), indicativo de perda de integridade da membrana, e perda do potencial de membrana mitocondrial, observado por coloraÃÃo de cÃlulas tratadas com rodamina 123 (Rod123) . AlÃm disso, nos ensaios de citometria de fluxo com anexina V e iodeto de propÃdio sugerem diminuiÃÃo da permeabilidade da membrana. A anÃlise ultraestrutural de epimastigotas e tripomastigotas, mostrou alteraÃÃes morfolÃgicas drÃsticas na mitocÃndria do parasita com a rede de kDNA rompido. O aumento de perfis de retÃculo endoplasmÃtico, aumento da eletrondensidade das membranas mitocondriais, a perda da organizaÃÃo interna do parasita, inchaÃo do corpo da cÃlula com o aparecimento de organelas deformada, formaÃÃo de estruturas de mielina-like indicativo de atividade autofÃgica, tambÃm foram observados nos parasitas tratados. Em conclusÃo, o LAAOBmar mostrou efeitos citotÃxicos em T. cruzi e esta aÃÃo à apenas parcialmente dependente da produÃÃo de H2O2 pela LAAOBmar. AlÃm disso, LAAOBmar induziu alteraÃÃes morfolÃgicas e fisiolÃgicas compatÃveis com perda de viabilidade e a morte.