BioprospecÃÃo de compostos isolados de Combretum fruticosum com potencial antiproliferativo em cÃlulas tumorais in vitro

• Main Author: Andrea Felinto Moura
• Other Authors: Manoel Odorico de Moraes Filho
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2015
• Subjects: FARMACOLOGIA
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=13869

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior === The use of substances from natural products has grown over the years, being the basis of therapeutic products. Lignans are molecules with large pharmaceutical use, which has aroused interest in search of new drugs to treat diseases. Much interest has been focused on their effectiveness as an antineoplastic agent. Thus, the aim of this study was to evaluate the in vitro anticancer potencial of compounds isolated from ethanolic extract of Combretum fruticosum, as well as, to study the possible mechanisms of action of a dibenzylbutyrolactone type lignan, trachelogenin, in colorectal cancer cells. The fractionation of the ethanolic extract of C. fruticosum resulted in the isolation of seven compounds: three triterpenes, two mixtures of β-sitosterol and stigmasterol steroids and two lignans Among them, the lignan, trachelogenin showed higher cytotoxic activity, with IC50 values ranging from 0.8 to 32.4 ÂM in glioblastoma (SF-295) and leukemic (HL-60) cells, respectively. While in normal cells (3T3-L1 and PBMC cells) the IC50 values were greater than 64.3 ÂM. The antiproliferative profile of different times of incubation was performed in SF-295 and HCT-116 cells. The cytotoxic effect on SF-295 cells was only observed after 72 hours of incubation, whereas in HCT-116 cells, this effect was observed after 48 hours, and it was enhanced after 72 hours of incubation. Before these results, analyzing cell cycle profile, membrane integrity, phosphatidylserine externalization and expression of proteins related to cell death by apoptosis in HCT-116 cells, it was not observed significantly changed, suggesting that the antiproliferative effect of this lignan is not related to mechanisms of cell death such as apoptosis and/or necrosis. Autophagy seems to be one of the cell death mechanisms involved in the antiproliferative effect of trachelogenin, because we observed an increase on number and size of acidic vesicular organelles (AVO) as well as the expression of proteins recruited during autophagy (LC3 A and B-II and Beclin-1) in cells treated with trachelogenin, although this seems not to be the only process involved. Therefore, we conclude that trachelogenin showed potent antitumor activity in vitro, and this effect may be related to the induction of autophagy. However, further tests should be conducted to confirm these proposals and to evaluate its mechanism of action and the therapeutic potential of this molecule better. === A utilizaÃÃo de substÃncias derivadas de produtos naturais tem crescido com o passar dos anos, formando a base dos produtos terapÃuticos. As lignanas sÃo molÃculas com amplo uso farmacÃutico, o que tem despertado interesse na pesquisa e busca de novos fÃrmacos no tratamento de doenÃas. Muito interesse tem sido focado na sua eficÃcia como agente antineoplÃsico. Com isso, o objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial anticÃncer in vitro de compostos isolados a partir do extrato etanÃlico dos talos da Combretum fruticosum, bem como, estudar os possÃveis mecanismos de aÃÃo da trachelogenina, uma lignana do tipo dibezilbutirolactona, em cÃlulas de cÃncer colorretal (HCT-116). O fracionamento do extrato etanÃlico da C. fruticosum resultou no isolamento de sete compostos: trÃs triterpenos, duas misturas dos esteroides β-sitosterol e estigmasterol e duas lignanas. Dentre eles, a trachelogenina mostrou maior atividade citotÃxica, apresentando valores de CI50 que variaram de 0,8 a 32,4 ÂM em cÃlulas tumorais de glioblastoma (SF-295) e leucÃmicas (HL-60), respectivamente, apÃs 72 horas de incubaÃÃo. Enquanto que, para cÃlulas nÃo tumorais (3T3-L1 e CMSP) esses valores foram maiores que 64,3 ÂM. O perfil antiproliferativo em diferentes perÃodos de incubaÃÃo foi realizado em cÃlulas SF-295 e HCT-116. O efeito citotÃxico em cÃlulas SF-295 foi observado apenas apÃs 72 horas de incubaÃÃo, enquanto que, em cÃlulas HCT-116, esse efeito foi observado apÃs 48 horas, sendo intensificados apÃs 72 horas de incubaÃÃo. Diante desses resultados, em cÃlulas HCT-116, a anÃlise do perfil do ciclo celular, integridade de membrana, externalizaÃÃo da fosfatidilserina e expressÃo de proteÃnas relacionadas ao processo de morte celular por apoptose nÃo apresentou alteraÃÃes significativas, sugerindo que o efeito antiproliferativo desta lignana nÃo està relacionado com processos de morte por apoptose e/ou necrose. A autofagia parece estar envolvida no mecanismo antiproliferativo da trachelogenina, visto que foi possÃvel verificar um aumento do nÃmero e do tamanho de organelas vesiculares Ãcidas (AVOs) bem como um aumento da expressÃo de proteÃnas recrutadas durante a autofagia (LC3 A e B II e Beclina-1) nas cÃlulas tratadas com a trachelogenina, embora nÃo pareÃa ser o Ãnico processo envolvido. Logo, podemos concluir que a trachelogenina apresentou potente atividade anticÃncer in vitro, e este efeito pode estar relacionado com a induÃÃo da autofagia. No entanto, outros testes devem ser realizados para confirmar as propostas acima apresentadas e para uma melhor avaliaÃÃo do mecanismo de aÃÃo e do potencial terapÃutico desta molÃcula.