| Summary: | Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico === Os efeitos locais provocados por venenos botrÃpicos sÃo caracterizados por edema, hemorragia e dor local. No entanto, os mecanismos fisiopatolÃgicos relacionados a esses venenos podem variar de acordo com a espÃcie. Esta caracterÃstica espÃcie-especÃfica pode prejudicar a eficÃcia da soroterapia. Desta forma, considerando a diversidade da resposta fisiopatolÃgica dos venenos, investigamos os mecanismos e mediadores envolvidos na resposta inflamatÃria local induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu (VBjsu). Camundongos Swiss fÃmeas foram submetidos à injeÃÃo intraplantar de soluÃÃo salina ou VBjsu (0,125-8 Âg/pata). Para o estudo dos mecanismos e mediadores envolvidos, diferentes sub-grupos de animais foram submetidas ao prÃ-tratamento com loratadina (um antagonista do receptor H1), composto 48/80 (para induzir a depleÃÃo dos mastÃcitos), capsaicina (para promover a dessensibilizaÃÃo das fibras C), infliximabe (um anticorpo anti-TNF-α), indometacina (um inibidor nÃo-especÃfico da COX), celecoxibe (um inibidor seletivo da COX-2) ou fucoidina (um modulador de P- e L-selectinas) administrados antes do VBjsu. O edema da pata foi medido por pletismografia. AlÃm disso, os tecidos da pata foram recolhidos para determinaÃÃo da atividade da mieloperoxidase (MPO), dosagem dos nÃveis de TNF-α, IL-1 e da imunoexpressÃo da COX-2. O efeito quimiotÃtico direto do VBjsu tambÃm foi estudado por meio do ensaio da cÃmara de Boyden, e o estado de ativaÃÃo dos neutrÃfilos humanos foi avaliado atravÃs da dinÃmica intracelular de cÃlcio em neutrÃfilos realizado in vitro com auxilio da microscopia confocal. O VBjsu causou uma resposta edematogÃnica concentraÃÃo e tempo dependentes com aumento da produÃÃo local de TNF-α, IL-1β e da imunoexpressÃo da COX-2 nos tecidos quando comparado ao grupo salina (P<0,05). Ambos, edema e migraÃÃo de neutrÃfilos foram impedidos pelos inibidores da COX (indometacina ou celecoxibe), ou pelo modulador de P - e L-selectinas (fucoidina) vs. VBjsu (P<0,05). O exame histopatolÃgico revelou que o VBjsu induz uma precoce migraÃÃo de neutrÃfilos para o local da lesÃo vs. o grupo salina (P<0,05). AlÃm disso, o VBjsu induz a quimiotaxia e ativa neutrÃfilos in vitro aumentando diretamente a dinÃmica de cÃlcio intracelular quando comparado ao RPMI (P<0,05). Portanto, o VBjsu induz uma resposta edematogÃnica precoce dependente da produÃÃo de prostanoides e da migraÃÃo de neutrÃfilos. === Local tissue reactions provoked by Bothrops venoms are characterized by edema, hemorrhage, pain, and inflammation; however, the mechanisms of tissue damage vary depending upon the species of snake. This mechanistic variability reduces the efficacy of antivenom treatment. Considering the diversity of intraspecific pathophysiological responses, we investigated the mechanisms and mediators involved in the local inflammatory response induced by the Bothrops jararacussu venom (VBjsu). Female Swiss mice were injected with either saline or VBjsu (0.125-8 Âg/paw). In a subset of VBjsu-treated mice, loratadine (an H1 receptor antagonist), compound 48/80 (for mast cell depletion), capsaicin (for C-fiber desensitization), infliximab (an anti-TNF-α antibody), indomethacin (a non-specific COX inhibitor), celecoxib (a selective COX-2 inhibitor) or fucoidan (a P- and L-selectins modulator) were administered before VBjsu treatment. Paw edema was measured by plethysmography. In addition, paw tissues were collected for the measurement of myeloperoxidase (MPO) activity, TNF-α and IL-1 levels, and COX-2 immunoexpression. The direct chemotactic effect of VBjsu was also studied using a Boyden chamber assay, and the in vitro calcium dynamic in neutrophils was investigated using confocal microscopy. VBjsu caused concentration- and time-dependent edematogenic responses and increased the local production of TNF-α and IL-1β as well as COX-2 expression vs. saline group (P<0.05). Both edema and neutrophil migration were prevented by pretreatment with cyclooxygenase inhibitors (indomethacin or celecoxib) or by the P- and L-selectins modulator, fucoidan vs. VBjsu (P<0.05). Furthermore, VBjsu induced a direct in vitro neutrophil chemotaxis by increasing intracellular calcium vs. RPMI (P<0.05). Therefore, VBjsu induces an early onset edema dependent upon prostanoid production and neutrophil migration.
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