Composite action of nitrosyl ruthenium complex-cis-Ru (bpy) 2IMn (NO) 3, in cavernous smooth muscle of humans

• Main Author: Alexandre SabÃia LeitÃo JÃnior
• Other Authors: LÃcio FlÃvio Gonzaga Silva
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2013
• Subjects: CIRURGIA
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=12206

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico === A deficiÃncia de Ãxido nÃtrico (NO) tem sido implicada como um dos principais mecanismos de disfunÃÃo endotelial e de DisfunÃÃo erÃtil. A busca de novas medicaÃÃes deve ser importante para diminuir a peso dessa doenÃa. O estudo avaliou o relaxamento, in vitro, induzido por um novo fÃrmaco doador de NO do complexo Nitrosil-RutÃnio (RUT-BPY-IMI) em tiras de corpos cavernosos de humanos, retirados de doadores de ÃrgÃos para transplante nÃo-vivos. Os tecidos, imersos em sistemas de banhos isolados em soluÃÃo de Krebs (pH7,4, 37ÂC), foram contraÃdos em soluÃÃo de K+ 80mM, e posteriormente novamente prÃ-contraÃdos com Fenilefrina (Phe 10ÂM) e curvas de concentraÃÃo-resposta ( 1012 a 10-4) foram obtidas. Inicialmente o fÃrmaco era comparado com o VeÃculo (DMSO) e com substÃncias jà utilizadas em outros estudos, que demonstraram bons efeitos relaxantes ( SNP, BAY 41-2272 e Vardenafila). Para esclarecer o mecanismo pela qual esse fÃrmaco promove seu relaxamento, foram realizados os seguintes experimentos: avaliaÃÃo do relaxamento alcanÃado com a contraÃÃo com K+80mM, adiÃÃo de um inibidos da Ãxido NÃtrico sintase (NOS), L-NAME (100ÂM); adiÃÃo de ODQ (30ÂM), um inibidor da GuanilatoCiclase solÃvel; um removedor de NO extracelular, Hemoglobina bovina (30ÂM); Glibenclamida ( 10ÂM), um bloqueador de canais de Ãons potÃssio ATP-dependente (Katp). Os tecidos expostos ao RUT-BPY-IMI, SNP e DMSO foram congelados em nitrogÃnio lÃquido para mensurar a quantidade de GMPc. A substÃncia provocou um relaxamento mÃximo (Emax) na musculatura lisa de corpo cavernoso importante ( Emax= 112,92% Â10,03% e pEC50=4,991Â0,1916), 60% a mais que o veÃculo. Comparando RUT-BPy-IMI com o SNP, a droga estudada mostrou tÃo eficiente como o SNP, nÃo mostrando diferenÃa entre os dois Emax (p=0,3437). Jà com o BAY 41-2272, nÃo houve diferenÃa estatÃstica em nenhum dos parÃmetros estudados (Emax e pEC50)..O Emax alcanÃado na curva concentraÃÃo- resposta com K+ 80mM foi cerca de 20% menor que a curva com Phe (10ÂM) (p=0,0208). NÃo houve inibiÃÃo do efeito relaxante mÃximo da droga com L-NAME (p>0,05), ou desvio da curva para a direita. A adiÃÃo ODQ (30ÂM) ao banho diminuiu em cerca de 50% o Emax da substÃncia (p<0,05). Jà a adiÃÃo da hemoglobina bovina (30ÂM) nÃo alterou a capacidade relaxante mÃxima da substÃncia (p<0,05). NÃo houve bloqueio de efeito mÃximo do fÃrmaco com a Glibenclamida (10ÂM) (p>0,05). O RUT-BPY produziu uma concentraÃÃo intracelular de GMPc 74% maior que o veÃculo, e menor que o SNP O RUT-BPY-IMI à uma substÃncia doadora NO, potente relaxadora da musculatura lisa do corpo cavernoso humano. A substÃncia possivelmente nÃo induz NOS, atua, provavelmente ativando a guanilatociclase solÃvel, produzindo GMPc, liberando NO intracelular. NÃo parece atuar nos canais de potÃssio, e nÃo atuam no Katp === Deficiency of nitric oxide (NO) has been implicated as one of the main mechanisms of Endothelial dysfunction and erectile dysfunction. The search for new medications must be important to lessen the burden of this disease. The study evaluated the relaxation, in vitro, induced by a new drug of the Nitrosyl-Ruthenium complex (RUT-BPY-IMI) into strips of corpora cavernosa, taken from non-living human organ donor for transplantation. The strips were immersed in tissue baths in Krebs solution (pH7 .4, 37 C). They were contracted in 80 mm K + solution, and later again with Phenylephrine (PHE 10 &#956;m) and concentration-response curves (10-12 to 10-4&#956;M) were obtained. Initially the drug was compared with the vehicle (DMSO) and then with substances which have already been used in other studies. These drugs showed very good relaxing effects (SNP, BAY 41-2272 and Vardenafil). To clarify the mechanism by which this drug promotes relaxation, the following experiments were carried out: evaluation of relaxation achieved with the contraction with 80 mm K +, effect of an inhibitor of nitric oxide syntase (NOS), L-NAME (100 &#956;m); addition of ODQ (30 &#956;m), an inhibitor of the soluble GuanylateCyclase; a remover of the extracellular NO, bovine Hemoglobin (30 &#956;m); Glibenclamide (10 &#956;m), a potassium ion channel blocker ATP-dependent (KATP). The tissues exposed to the RUT-BPY-IMI, SNP and DMSO were frozen in liquid nitrogen to measure the amount of GMPc.The substance caused an EMAX relaxation in smooth muscle of the corpus cavernosum (EMAX = 112.92%  10.03% and pEC50 = 4.991  0.1916), 70% more than the vehicle. Comparing RUT-BPY-IMI with the SNP, the drug studied showed as efficient as the SNP, there were no difference between both EMAX (p = 0,3437),. Compared with the BAY 41-2272, there was no statistical difference in any of the parameters studied (pEC50 and EMAX).. The EMAX achieved in concentration-response curve with 80 mm K + was about 20% lower than the curve with PHE (10 &#956;m) (p = 0.0208). There was no inhibition of the relaxing effect of drug with L-NAME (p 0.05 >), or deviation from the curve to the right. The addition of ODQ (30 &#956;m) to the bath, decreased 50% of the EMAX of the substance (p<0,05). The addition of bovine hemoglobin (30 &#956;m) did not alter the capacity maximum relaxing substance (p<0,05). There was no inhibition or blockade of the maximum effect of the drug with Glibenclamide (10 &#956;m) (p 0.05 >). The RUT-BPY-IMI tissue concentration of cGMP produced was 74% over the vehicle, and less than the SNP (p<0,05).RUT-BPY-IMI is a NO-donor, it produces a powerful relaxation of the smooth muscle of the corpus cavernosum. Probably, the substance does not induce NOS, acts by activating the soluble guanylateCyclase, which produces cGMP, releasing the intracellular NO. It seems that it does not activate potassium channels, and not act throw KATP.