CaracterizaÃÃo bioquÃmica parcial do lÃtex de Calotropis procera (Ait.) R.Br. e efeito sobre a eclosÃo de ovos e desenvolvimento larval do mosquito transmissor da dengue

• Main Author: GlaÃs de Paiva Bandeira
• Other Authors: MÃrcio Viana Ramos
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2006
• Subjects: LÃtex; Calotropis procera; Stegomyia aegypti; Latex; Calotropis prowax; CiÃncias BiolÃgicas
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=7565

nÃo hà === TÃtulo - CaracterizaÃÃo BioquÃmica Parcial do LÃtex de Calotropis procera (Ait.) R. Br. e Efeito Sobre a EclosÃo de ovos e Desenvolvimento do mosquito transmissor da Dengue. Autor â GlaÃs de Paiva Bandeira. IntroduÃÃo - O arbusto Calotropis procera (Ait.) R.Br. à um membro da famÃlia Asclepiadaceae. à vastamente encontrado no Estado do Cearà e tem como caracterÃstica a produÃÃo de lÃtex. Ao lÃtex sÃo atribuÃdas propriedades tÃxicas e farmacolÃgicas. Neste trabalho, uma caracterizaÃÃo bioquÃmica parcial do lÃtex foi estabelecida e seu efeito sobre a eclosÃo de ovos e desenvolvimento larval do Mosquito transmissor da Dengue (Stegomyia aegypti) foi avaliado. MÃtodos - O lÃtex foi coletado de plantas nÃo cultivadas e apÃs etapas de diÃlise e centrifugaÃÃo deu origem a trÃs fraÃÃes: LP (rica em proteÃnas), DL (compostos de pequeno tamanho molecular e solÃveis em Ãgua) e RL (fraÃÃo rica em isopreno, insolÃvel em Ãgua). Uma anÃlise fÃsico-quÃmica de elementos inorgÃnicos foi realizada. As fraÃÃes foram analisadas atravÃs de eletroforese em uma e 2 dimensÃes, espectrometria de massas, tÃcnicas cromatogrÃficas e atividades enzimÃticas. A presenÃa de glicoproteÃnas foi investigada atravÃs de coloraÃÃo em gel e anÃlise por RessonÃncia PlasmÃnica de SuperfÃcie. Bioensaios para atividade ovicida e larvicida foram realizados com as fraÃÃes LP e DL, alÃm do lÃtex Ãntegro. Resultados â A fraÃÃo LP representou 10,03 % da massa seca do lÃtex enquanto que DL representou menos que 1 % e RL 84,97 %. O lÃtex possui quantidades apreciÃveis de HCO-3, Mg+2, Cl-, quantidades menores de SO4-, NO3- , NO-2, NH4+ e P-3, enquanto que Ca+2 e Fe+2 nÃo foram detectados. A fraÃÃo PL apresentou proteÃnas com massa molecular relativa entre 8.000 - 97.000 Da e isto foi confirmado por Espectrometria de massa. Foi verificado que as fraÃÃes RL e LP eram similares e peptÃdeos foram detectados na fraÃÃo DL. A fraÃÃo LP mostrou-se heterogÃnea em gel de eletroforese 2-D e as proteÃnas exibiram carÃter essencialmente bÃsico. TrÃs picos protÃicos foram recuperados por troca iÃnica. A fraÃÃo LP foi capaz de se ligar à matriz de quitina e foi detectada atividade quitinÃsica. Atividades para, superÃxido dismutase e ascorbato peroxidase foram detectadas, mas nÃo para catalase. GlicoproteÃnas do tipo oligomanosÃdicas e N-acetillactosamina parecem estar presentes na fraÃÃo LP. O lÃtex total causou 100 % de mortalidade para larvas do terceiro estÃgio de St. aegypti. As fraÃÃes tambÃm foram tÃxicas causando 100 % mortalidade em 24 hs. Quando as fraÃÃes LP e DL foram aquecidas a 100 ÂC a aÃÃo larvicida da fraÃÃo LP diminuiu e a da fraÃÃo DL foi pouco afetada sugerindo pouca termoestabilidade dos componentes ativos em LP. As fraÃÃes LP e DL foram parcialmente efetivas em prevenir a eclosÃo dos ovos do mosquito e muitos dos indivÃduos nÃo atingiram o primeiro ou segundo estÃgio. à esperado que os efeitos tÃxicos observados sobre a eclosÃo dos ovos e desenvolvimento das larvas poderiam ser, em parte, devido ao conteÃdo protÃico de LP === Calotropis procera (Ait.) R.Br. (Asclepiadaceae) is a well-known medicinal plant with leaves, roots and bark being exploited by popular medicine to fight many human and animal diseases. Despite, the lack of information about its biochemical content has stimulated the present study. Healthy plants of C. procera growing in the field around the beaches of Fortaleza were used as the source of fresh latex. The latex was collected in distilled water to give a dilution rate of 1:2 (v:v). The mixture was gently agitated during collection to overcome the natural coagulation effect of the material. Later in the laboratory the samples were centrifuged at 5.000 x g during 10 min at room temperature. The rubber-rich precipitate was separated and the supernatant was exhaustively dialyzed against distilled water at room temperature and recentrifuged using the conditions described above. Three distinct fractions were obtained: LP (rich in proteins); DL (rich in low molecular weight molecules) and RL (rich in poly-isoprene rubber). LP fraction constitutes 10.03 % of the dry matter of the latex while DL > 1% and RL 84.97 %. The latex possesses relevant amounts of HCO-3, Mg+2, Cl-, lower quantities of SO4-2 , NO3- , NO2-, NH4+ and P-3, while Ca+2 and Fe+2 were not detected. Proteins in LP showed molecular mass varying between 8,000 - 97,000 Da further confirmed by mass spectrometry. They are essentially basic proteins. RL and LP exhibited similar protein profile and peptides were detected in DL. LP could be fractionated in three newly fractions by ion exchange chromatography and able to bind chitin. Enzymatic activity of chitinases, superoxide dismutase and ascorbate peroxidases were detected. GlicoproteÃnas bearing oligomanosÃdic and N-acetylgalactosamine seems to be present in LP. The whole latex was shown to cause 100 % mortality of 3rd instars within five minutes. Both LP and DL fractions were partially effective to prevent egg hatching and most of individuals growing under experimental conditions died before reaching 2nd instars or stayed in 1st instars. Besides, the fractions were very toxic to 3rd instars causing 100 % mortality within 24 hs. When both fractions were submitted to heat-treatment the toxic effects of LP were strongly diminished while that of DL diminished slowly suggesting low thermostability of the toxic compounds in LP. According to the results, the latex of C. procera exhibits strong insecticide action upon St. aegypti and it is expected that proteins are at least in part involved in that an activity