| Summary: | CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior === CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior === Oral mucositis is one of the most common collateral effects in patients undergoing treatment with 5-fluorouracil (5-FU). In this context, It has been previously shown that with only two doses of the protein from the latex fraction of Calotropis procera it was possible to prevent damage caused by 5-FU in the oral mucosa. Thus, the aim of this study was investigate the effect of subfractions of the latex protein (PL) of Calotropis procera in the prevention of oral mucositis induced by 5-FU in hamsters. At first, the subfractions (PI, PII and PIII) of the PL of Calotropis procera were identified by chromatography. Hamsters received 0.9% saline, i.p., (Control) or Mechanical Trauma (TM) or 5-FU (60mg / kg and 40mg / kg, i.p., respectively, on the 1st and 2nd day of the experimental protocol). 24h and 72h after of the last dose of the chemotherapeutic, PL 5mg / kg (PL + 5-FU) or its subfractions were administered: PI 5mg / kg (PI + 5-FU); PII 5mg / kg (PII + 5-FU); PIII 5mg / kg (PIII + 5-FU) and PII IAA 5mg / kg (PII IAA + 5-FU). On the 4th day, all experimental groups, except the control, were submitted to TM. The animals were observed daily until the tenth day of the experimental protocol to evaluate survival and weight loss. Then, the animals were anesthetized and their jugal mucosas were exposed for the mascroscopic analysis. Hamsters were euthanized and their jugal mucosa were collected to evaluate the following parameters: histopathological analysis, neutrophil recruitment (myeloperoxidase dosage, MPO), oxidative stress (GSH and MDA levels), inflammation (levels of TNFα and IL- ELISA, including protein expression of IL-1β, ICAM-1 and Iba-1 by immunohistochemistry) and integrity of collagen fibers (PicroSirius Red staining). From the PL fraction of Calotropis procera, the subfractions PI, PII and PIII were identified and showed to be quite distinct. In addition, PII and PIII showed intense proteolytic activity. The proteolytic activity of PII was inhibited with iodoacetamide, leading to PII IAA. 5-FU reduced survival, caused intense weight loss, caused extensive ulcer formation, development of abscesses, marked erythema, haemorrhage and edema. In addition, it also promoted formation of ulcers, characterized by loss of integrity of the jugal epithelium and intense infiltration of inflammatory cells. In addition, 5-FU increased the levels of MPO, MDA, IL-1β and TNF-α, including the expression of ICAM-1 and Iba-1, as well as decreased GSH levels and reduced collagen fibers in the oral mucosa compared to the control group. Whereas only PL or IAA PII were able to prevent these 5-FU promoted alterations. It is concluded that PII with its proteolytic activity inhibited by IAA is the subfraction responsible for the previously observed beneficial effects of PL on oral mucositis induced by 5-FU. Therefore, PII IAA attenuates 5-FU induced oral mucositis by reducing oxidative stress, inflammation (by decreasing the expression of adhesion molecules, neutrophil recruitment and macrophage activation with consequent decrease of IL-1β and TNF- Α). Thus, it prevents degradation of collagen fibers, including weight loss and increased survival in animals submitted to experimental oral mucositis. === A mucosite oral à um dos efeitos colaterais mais comuns em pacientes submetidos ao tratamento com 5-fluorouracil (5-FU). Nesse contexto, foi demonstrado que a fraÃÃo Proteica do LÃtex (PL) da Calotropis procera, com apenas duas doses, preveniu os danos causados pelo 5-FU na mucosa oral. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito de subfraÃÃes da proteÃna do lÃtex (PL) da Calotropis procera na prevenÃÃo da mucosite oral induzida por 5-FU em hamsters. As subfraÃÃes (PI, PII e PIII) da PL da Calostropis Procera foram obtidas por cromatografia. Hamsters receberam salina 0,9%, i.p., (Controle ou Trauma MecÃnico, TM) ou 5-FU (60mg/kg e 40mg/kg, i.p., respectivamente) no 1 e 2 dia do protocolo experimental. ApÃs 24h e 72h da Ãltima dose do quimioterÃpico, administrou-se PL 5mg/kg (PL+5-FU) ou suas subfraÃÃes: PI 5mg/kg (PI+ 5-FU); PII 5mg/kg (PII + 5-FU); PIII 5mg/kg (PIII +5-FU) e PII IAA 5mg/kg (PII IAA+ 5-FU). No 4 dia, todos os grupos, exceto o grupo controle, foram submetidos ao TM. Os animais foram observados diariamente atà o 10 dia do protocolo experimental para avaliar a sobrevida e a perda ponderal. ApÃs a Ãltima anÃlise, os animais foram anestesiados e suas mucosas jugais foram expostas para a anÃlise macroscÃpica e em seguida, foram eutanasiados e suas mucosas jugais foram coletadas para avaliar os seguintes parÃmetros: anÃlise histopatolÃgica, recrutamento de neutrÃfilos (dosagem de mieloperoxidase, MPO), estresse oxidativo (nÃveis de GSH e MDA), inflamaÃÃo (nÃveis de TNFα e IL-1β por ELISA, incluindo expressÃo proteica de IL-1β, ICAM-1 e Iba-1 por imunohistoquÃmica) e integridade das fibras colÃgenas (coloraÃÃo de PicroSirius Red). A partir da fraÃÃo PL da Calotropis procera, foram identificadas 3 subfraÃÃes PI, PII e PIII bem distintas. Foi realizado um Zimograma e as fraÃÃes PII e PIII demonstraram intensa atividade proteolÃtica. Devido a porcentagem de sobrevida, a atividade proteolÃtica de PII foi inibida com iodoacetamida, originando PII IAA. 5-FU reduziu a sobrevida, causou intensa perda ponderal, ocasionou formaÃÃo de Ãlceras extensas, desenvolvimento de abscessos, de eritema acentuado, de hemorragia e de edema. AlÃm disso, tambÃm promoveu formaÃÃo de Ãlceras, caracterizado pela perda da integridade do epitÃlio da mucosa jugal e intenso infiltrado de cÃlulas inflamatÃrias. Adicionalmente, 5-FU aumentou os nÃveis de MPO, MDA, IL-1β e TNF-α, incluindo a expressÃo de ICAM-1 e Iba-1, bem como, diminuiu os nÃveis de GSH e reduziu as fibras colÃgenas nas mucosas jugais comparado ao grupo controle. Por outro lado, apenas PL ou PII IAA foram capazes de prevenir essas alteraÃÃes promovidas por 5-FU. Conclui-se que PII com sua atividade proteolÃtica inibida pelo IAA à a subfraÃÃo responsÃvel pelos efeitos benÃficos observados anteriormente da PL na mucosite oral induzida por 5-FU. Adicionalmente, PII IAA atenua a mucosite oral induzida por 5-FU por reduzir o estresse oxidativo, a inflamaÃÃo (por diminuir a expressÃo de molÃculas de adesÃo, o recrutamento de neutrÃfilos e a ativaÃÃo de macrÃfagos com consequente diminuiÃÃo de IL-1β e TNF-α). AlÃm disso, a subfraÃÃo PII IAA possui efeito antioxidante e anti-inflamatÃrio, previne a degradaÃÃo das fibras colÃgenas, incluindo a perda de peso, e aumento da sobrevida em animais submetidos à mucosite oral experimental
|
|---|
