| Summary: | FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà === Complexos metÃlicos Ru-NO estÃveis, nÃo formadores de cianeto, sÃo capazes de promover relaxamento do mÃsculo liso vascular e sÃo compostos potenciais para uso em distÃrbio cardiovasculares como angina e crise hipertensiva. O composto [Ru(bpy)2(tioureia)NO(PF6)3] â FOR0812, foi estudado com objetivo de demonstrar possÃvel efeito vasorelaxante in vitro e anti-hipertensivo in vivo. Ratos Wistar machos (200-250g) foram sacrificados, anÃis de 4mm de aorta torÃcica foram montadas em banho de ÃrgÃos de 5 ml a 37ÂC e aerados com mistura carbogÃnica (5%CO2 em 95%O2). Os tecidos foram acoplados a um transdutor isomÃtrico sob tensÃo passiva de 1g e os registros experimentais foram obtidos atravÃs de um sistema de aquisiÃÃo de dados. A droga foi adicionada de maneira cumulativa (10-12 a 10-4M) no platà das contraÃÃes. Os estudos in vivo foram feitos em ratos com hipertensÃo renovascular (2 rins-1 clip), ratos Dahl sensÃveis ao sal e ratos espontaneamente hipertensos (SHR) recebendo o composto FOR0812 (1mg/Kg) por via oral durante 15 dias. Os efeitos agudos na hemodinÃmica sistÃmica e eletromecÃnica cardÃaca tambÃm foram estudados. Ademais, estudamos a razÃo da variaÃÃo da pressÃo intracavernosa pela variaÃÃo na pressÃo arterial em modelos de disfunÃÃo erÃtil por neuropatia diabÃtica apÃs tratamento agudo com FOR0812. Para os estudos hemodinÃmicos um microcateter pressÃo-volume foi inserido na carÃtida direita e deslocado atà o ventrÃculo esquerdo. Similarmente, a veia jugular esquerda foi canulada para infusÃo em bolus do composto nas doses 0,001 a 1mg/Kg. A adiÃÃo de FOR 0812 induziu relaxamento na aorta da ordem de 103Â2,3 % com IC50 de 0,24 ÂM[0,084 â 0,72] comparado com 108Â5,3% e 0,05ÂM[0,025 â0,12] obtido com SNP. A potÃncia do FOR 0812 foi reduzida em oito vezes por L-NAME(100ÂM). Por outro lado, a resposta relaxante do metalofÃrmaco foi completamente abolida na presenÃa de ODQ (10ÂM),(*p<0,05). A potÃncia relaxante do composto FOR0812 tambÃm foi reduzida na presenÃa de inibidores de canais de K+ na ordem de 5,8 vezes (glibenclamida), em 5,4 vezes (mistura apamina-iberotoxina) e em 11,2 vezes (tetraetilamÃnio). Em tecidos prÃ-tratados com hidroxicobalamina(100ÂM), um removedor de Ãxido nÃtrico (NO.) a resposta mÃxima relaxante para FOR0812 foi grandemente reduzida (EmÃx=103Â2,3 % vs. 32,4%, *p<0,05). No entanto a remoÃÃo do Ãnion nitroxil (NO-), em tecido prÃ-incubados com 3 mM de L-cisteÃna, nÃo afetou a resposta relaxante para FOR0812. Similarmente, o bloqueio da enzima RhoA/Rho kinase (ROCK) com fasudil (HA-1077) nÃo afetou a resposta relaxante para FOR0812. Em tecidos pretratados com indometacina, houve reduÃÃo da potÃncia em duas vezes quando comparado ao FOR0812. In vivo, o composto reduziu a pressÃo arterial de animais com hipertensÃo renovascular (2rins-1clipe) jà no quarto de dia de tratamento (181,5Â3,6 mmHg vs. 149Â3,1 mmHg) e continuou diminuindo os nÃveis pressÃricos atà o fim do tratamento (171.1Â3,2 mmHg âcontrole vs. 111.4Â6,9mmHg - tratado). Animais tratados apenas com salina tiverem nÃveis pressÃricos altos (>160mmHg) atà o fim do perÃodo experimental. Nos animais com hipertensÃo sal-sensÃvel, o composto reduz a pressÃo jà no sexto dia de tratamento (158,8 5,6 mmHg vs. 122,6Â6,7mmHg-tratado) e o composto continua controlando a pressÃo atà o final do tratamento (158,9Â4,2 mmHg vs. 118,1Â5,8mmHg-tratado). Animais tratados com salina (veÃculo) tiveram pressÃo elevada atà o final do experimento.Este composto, nas doses de 0,001; 0,01; 0,1 e 1 mg/Kg , diminui a resistÃncia perifÃrica total (expressa em mmHg x ml/min) de ratos normotensos de valores controle de 6,5Â0,8 para 5,6Â0,7;4,9Â0,6; 4,8Â0,6 e 2,6Â0,6. Aumenta gradativamente o trabalho sistÃlico e o dÃbito cardÃaco, por diminuiÃÃo de pÃs-carga. Nas doses maiores (0,1 e 1 mg) tende a diminuir a dp/dt mÃxima por reduzir pressÃo do ventrÃculo esquerdo por diminuiÃÃo de pÃs-carga. NO entanto, o trabalho sistÃlico recrutÃvel nÃo à prejudicado atà a dose de 1mg/kg. O composto FOR0812 tem atividade antihipertensiva por reduzir resistÃncia perifÃrica total atuado como vasodilatador arterial como doador de NO de maneira estÃvel, lenta e sem geraÃÃo de cianeto. === Ruthenium coordinated nitric oxide donors which do not release cyanide can be less toxic models for the development of drugs to treat angina and hypertensive crisis. The compound [Ru(bpy)2(tioureia)NO(PF6)3]â FOR0812, was synthesized and probed in vitro for its potential vasodilator activity and in vivo for its antihypertensive properties. First, we tested its effects on thoracic aortic rings harvested from male Wistar rats (200-250g). The rings were mounted in 5 ml organ baths in Krebs-Henseleit warmed to 37ÂC and gassed with 5%CO2 in 95%O2. The tissues were coupled to isometric force transducers under a 1g passive tension and coupled to a data acquisition system and recorded by using LabChart 7.0. FOR0812 was added cummulatively (10-12 a 10-4M) in aortic rings precontracted with phenylephrine or high potassium (60mM). On the other hand, in order to test the potential antihypertensive effects of FOR0812 the drug was administred at 1mg/kg by the oral route during 15 days to 2kidney-1clip hypertensive rats (2K-1C), Dahl salt-sentitive rats (DS) and to spontaneously hypertensive rats (SHR). In addition, the acute effects of intravenous bolus injections of 0.001- 1mg/Kg FOR0812 on systemic hemodynamics and cardiac eletromechanics were also studied by using microtip pressure-volume catheters inserted in the left ventricle and electrocardiogram analysis.FOR 0812 induced a concentration-dependent relaxation of 103Â2.3 % with an IC50 of 0.24 ÂM[0.084 â 0.72] while the positive control sodium nitroprusside had a maximal relaxant effect of 108Â5.3% with an IC50 of 0.05 ÂM[0.025 â0.12]. 100 ÂM L-NAME did not affect the maximal vasorelaxation induced by FOR0812 but reduced potency by 8-fold. Nevertheless, the vasorelaxant effect of FOR0812 was completely blunted by ODQ (10ÂM), (*p<0.05). The potency for the vasorelaxant of FOR0812 was reduced 5.8-fold by glibenclamide, 5.4-fold by apamin-carybdotoxin and by 11-fold by tetraethylammonium. The vasorelaxant response was greatly blunted by a nitric oxide scavenger, hydroxocobalamin (FOR0812=103Â2.3 % vs. FOR0812+hydroxocobalamin=32.4%, *p<0.05). However, the removal of nitroxyl anions (NO-) with 3 mM L-cystein, did not affect the vasorelaxant effect of FOR0812. Similarly, the blockade of RhoA/Rho kinase (ROCK) with fasudil (HA-1077) did not affect the vasorelaxant effect of FOR0812. The blockade of prostaglandin synthesis with indomethacin did not affect the maximal vasorelaxation incuced by FOR0812 but reduced its potency by 2-fold. Strikingly, FOR0812 reduced mean arterial blood pressure (MAP) of 2K-1C rats from 181.5Â3.6 mmHg to 149Â3.1 mmHg after 4 days of treatment and continued to decrease MAP towards normal levels and at the end of the experimental period, i.e., 15th day the MAP of control rats was 171.1Â3,2 mmHg while rats treated with FOR0812 had values of 111.4Â6.9 mmHg. In the group treated only with vehicle (saline) the MAP continued high during the whole experimental period (>160mmHg). FOR also reduced MAP of DS rats from 158.8 5.6 mmHg to 122.6Â6.7mmHg after six days of treatment and this effect lasted throughout the experiment and at the end the control group treated with vehicle had MAP of 158.9Â4.2 mmHg while DS rats treated with FOR0812 had MAP of 118.1Â5.8mmHg. The intravenous injection of FOR at 0.001; 0.01; 0.1 and 1 mg/Kg decreased vascular resistance (expressed in mmHg x ml/min) of normotensive rats from control values of 6.5Â0.8 to 5.6Â0.7;4.9Â0.6; 4.8Â0.6 and 2.6Â0.6, respectively. FOR0812 increases in a dose-dependent fashion the systolic work and cardiac output due to decreased afterload. At the higher doses, this compound decreases cardiac maximal dP/dt due to decreased left ventricular pressure. However, at the dose range used, the preload recruitable stroke work is not affected. In conclusion, FOR0812 has antihypertensive effect decreasing cardiac afterload and can decrease wall stress and myocardial oxygen demand in patients with hypertension and acute ischemic heart disease.
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