AvaliaÃÃo in vitro da berberina frente Ãs cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans resistentes ao fluconazol e sua atividade em isolados formadores de biofilme.

• Main Author: Anderson Ramos da Silva
• Other Authors: HÃlio Vitoriano Nobre JÃnior
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal do Cearà 2015
• Subjects: FARMACIA
• Online Access: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=16738

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior === Atualmente, a incidÃncia de infecÃÃes fÃngicas tem aumentado significativamente, contribuindo assim para morbidade e mortalidade. Esse fato que tem como umas das principais causas o aumento da resistÃncia antimicrobiana, estando associado à produÃÃo de biofilme que tem um elevado nÃvel de resistÃncia antimicrobiana juntamente com o arsenal farmacolÃgico antifÃngico limitado, quando comparado ao arsenal antibacteriano, leva a necessidade do desenvolvimento de novas estratÃgias terapÃuticas. A berberina tem demonstrado ter ampla atividade antibacteriana e antifÃngica. Dentro desse contexto, o objetivo foi avaliar o potencial antifÃngico da berberina frente Ãs cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans resistentes ao fluconazol, bem como avaliar o efeito da berberina frente Ãs cepas de Candida spp. em forma de bioflme. A avaliaÃÃo do efeito antifÃngico foi determinada pelo mÃtodo de microdiluiÃÃo em caldo (M27-A3) e por meio de tÃcnicas de citometria de fluxo em que foram avaliados elementos que contribuam para elucidaÃÃo do provÃvel mecanismo de aÃÃo da berberina. Para a avaliaÃÃo da atividade de cÃlulas fÃngicas do biofilme, utilizou-se o ensaio colorimÃtrico com o sal de tetrazÃlio (MTT), a fim de determinar a suscetibilidade das cÃlulas sÃsseis. As cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans resistentes ao fluconazol apÃs 24h e 72h apresentaram a ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM) igual 8 Âg/mL e 16 â 24 Âg/mL, respectivamente, demonstrando assim, apresentar atividade antifÃngica significativa, que sendo confirmada posteriormente por tÃcnicas da citometria de fluxo, apÃs a exposiÃÃo das cÃlulas ao composto sintÃtico cloreto de berberina, foram observadas alteraÃÃes concementes a ruptura da integridade da membrana plasmÃtica e mitocondrial, danos ao DNA e provavelmente o desencadeamento de tais eventos conduziu a morte celular por apoptose. Em relaÃÃo aos isolados formadores de biofilme, esses ao serem expostos a berberina apresentaram CIM inferior a 37,5 Âg/mL (CIM50), sendo a reduÃÃo considerada estatisticamente significativa na atividade celular do biofilme (P < 0,001). Sendo assim, as atividades, no presente estudo aliados a busca de mais elementos que contribuam para a melhor compreensÃo e o desenvolvimento biotecnolÃgico de um fitoproduto, tomando como exemplo a molÃcula de estudo, a berberina, sendo aqui elencada como possÃvel protÃtipo de molÃculas promissoras com propriedades antifÃngicas. === Currently, the incidence of fungal infections has increased significantly, contributing to morbidity and mortality. It has as one of its main causes the increase of antibiotic resistance. Recently associated with biofilm production, which has a high level of antibiotic resistance, coupled with the limited antifungal pharmacological when compared to antibacterial, it leads to the need for the development of new therapeutic strategies. The berberine has shown to have broad antibacterial and antifungal activity. In this context, the objective was to evaluate the antifungal potential of berberine against strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans resistant to fluconazole and evaluate the effect of berberine against strains of Candida tropicalis in biofilm formation. The evaluation of the antifungal effect was determined by microdilution in broth (M27-A3) and by flow cytometry techniques, in which the likely mechanism of action of that compound was evaluated. For the assessment of the biofilm, a colorimetric assay (MTT) was used to determine the susceptibility of sessile cells. Strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans resistant to fluconazole after 24h and 72h showed the minimum inhibitory concentration (MIC) equal to 8 &#956;g/mL and 16-24 &#956;g/ml, respectively. It demonstrates a significant antifungal activity, which, in accordance with cytometry, after the cells were treated with berberine, promoted damage to DNA, changes in the integrity of the plasma and mitochondrial membrane, caused and probably led to cell death by apoptosis. Regarding isolated biofilm formers, when exposed to berberine, they showed a MIC of less than 37.5 mg/mL (MIC 50%), causing a statistically significant reduction in the cellular activity of the biofilm (P <0.001). Therefore, considering these activities, coupled with the lack of studies related to biotechnological development of a phytoproduct, berberine becomes a source of promising molecules with antifungal properties.